肝干细胞分化调控的研究
尽管目前对于肝干细胞存在的空间位置还不明确，但对它的存在，以及其分化产生肝细胞和胆管上皮细胞，进而参与肝脏结构和功能动态平衡维持的基本生物学特性，则开始有了越来越多的研究。
为了认识肝干细胞分化调控的机制，我们采用单细胞RNA测序技术，对不同生理状态和不同分化状态的肝干细胞/肝前体细胞的表达特性进行了分析，发现了一些特别的现象。这一研究，为肝干细胞分化调控机制的研究提供了一个新的平台，也将有助于肝脏损伤修复和肝脏衰老相关疾病发生机制研究的深入。
肝癌的转化医学研究
在肝癌中，分子诊断标记物的筛选、分子分型及个体化靶向药物的发展是转化医学中非常重要的领域。转化医学的发展将沟通基础研究及临床实践，不但可以提高对肝癌发生、发展相关分子机制的理解，而且将促进肝癌临床治疗的发展及进步。
乙肝快速检测试剂在POCT中的应用及标准探讨
乙肝血清学标志物快速检测试剂已广泛应用于手术前检测，现场献血员筛查等其他应急检测，以及基层医疗机构常规临床检测，检测内容包括HBsAg、Anti-HBs、HBeAg、Anti-HBe、Anti-HBc 等常规的5项乙肝标志物，这些快速检测试剂具有较传统方法更为快速、简便的特点，在POCT检测中具有一定的临床应用意义。
乙肝快速检测试剂多采用胶体金法，其他方法包括胶体硒法、乳胶法等，其原理与传统方法的酶联免疫法相同，由于判断方法的不同，操作过程快速、简便，与酶联免疫法、化学发光法等试剂质量标准存在差异，主要表现在灵敏度方面，HBsAg最低检出量，酶联免疫法试剂可达到0.05~0.1IU/ml, 快速检测试剂仅为4~5 IU/ml，Anti-HBs最低检出量，酶联免疫法试剂10IU/ml, 快速检测试剂30 IU/ml，另3种乙肝标志物最低检出限酶联免疫法试剂均高于快速检测试剂2~3倍稀释度。因此，快速检测试剂也在临床应用受到一定的限制。
乙肝快速检测试剂属于医疗器械管理，在众多的乙肝试剂申报注册中尚无快速检测试剂进口注册，已申报的注册产品标准存在不规范，目前已建立了乙肝5项试剂的国家参考品，为制订该产品的医疗器械行业标准提供依据。
严重肝脏疾病的细胞治疗技术
肝脏是人体的重要器官之一，具有代谢、合成、解毒、排泄和免疫等生理功能。在临床上常见的肝脏损伤因素包括病毒感染、药物性损害、过量饮酒和自身免疫紊乱等。当患者表现为严重的肝病（重度急性或慢性肝炎、肝硬化、肝衰竭或肝癌等）时，在常规的保肝对症治疗基础上，应用新型细胞治疗技术可以减轻肝脏的损害，改善病人的症状，甚至可以提高临床的疗效，促进病人早日康复。
目前，国内外报道肝病细胞治疗方法有：免疫细胞治疗（NK细胞、DC细胞、CIK细胞和激活的T细胞等）、干细胞治疗（自体骨髓干细胞、自体间充质干细胞、人脐带间充质干细胞治疗）等。然而，开展肝病细胞治疗需要具备一些基本而且必要条件。例如：有符合条件的细胞制备平台和质量控制SOP、具备基础和临床兼备的专业人员队伍、符合伦理知情同意要求、获得有关部门的审批等一系列的条件。这里我们结合临床常见的肝病诊治实践，分别介绍免疫细胞治疗和干细胞治疗肝病相关的国内外进展；同时着重强调科学设计临床细胞治疗方案和客观评价安全性、临床疗效的重要性；分析肝病领域细胞治疗存在的、亟待解决的主要问题，并和大家一起展望今后肝病领域细胞治疗的发展前景。
自体骨髓间充质干细胞移植治疗乙肝肝衰竭
本课题组自2005年开始进行自体MSCs移植治疗乙肝肝衰竭的研究，我们发现：移植手术成功率100％，未出现严重不良反应及并发症。自觉症状如食欲等有改善，术后一到四周，治疗组肝功能恢复较对照组好，ALB、TBIL从术后第二周开始，手术组的改善明显超过对照组；从PT和MELD评分来看，从术后第三周开始，手术组的改善明显超过对照组。
另外，移植组患者MELD评分的显着改善最长可持续至术后第36周。而在最短3个月，最长48个月的长期随访观察中，我们发现：治疗组与对照组的肝癌发生、死亡情况之间均无显着性差异--并未能显着改善乙肝肝衰竭患者的长期预后；但是在移植组中，肝硬化患者与非肝硬化患者的肝癌发生、死亡情况之间亦无明显差异（肝硬化是肝癌的高危因素之一，也是导致乙肝患者死亡的高危因素之一）--该结果说明：自体MSCs移植安全有效，并可能对于肝硬化患者存在更积极的良性作用。
干扰素治疗丙肝疗效预测及病毒耐药机理
丙肝病毒（HCV）感染后，80%以上导致慢性持续感染。干扰素联合利巴韦林治疗，对50%的病人有效。但存在普遍的毒副作用及费用昂贵。虽然FDA已经批准作用于HCV复制所必需的的蛋白酶抑制剂（DAA）用于难治性I型丙肝病人"三联"治疗，但广泛的快速的病毒耐药及昂贵的治疗费用限制了其广泛应用。因此研究治疗前的疗效预测方法及丙肝病毒耐药的分子机理，对开展丙肝个体化治疗及新型抗病毒药物研究非常必要。采用高通量基因芯片检测，我们从慢性丙肝病毒感染者治疗前肝组织内筛选出18个表达差异基因（Chen, et al. Gastroenterology 2005），预测病人对干扰素治疗是否有效的准确率在95%以上(Chen, et al. Gastroenterology 2010)。这18个表达差异基因中，大部分是干扰素刺激（敏感）基因（ISG），而且3个基因（ISG15， USP18，CEB）同时位于一个仅有5个基因组成的信号传导通路中（类泛素化ISG15/USP18通路）。这些ISG都在治疗无效病人肝组织内高表达。
为此，我们提出内源性干扰素信号传导通路及ISG15/USP18类泛素化通路的激活与丙肝病毒耐药及持续感染有关。采用丙肝病毒体外培养系统，我们对ISG15/USP18信号传导通路在HCV复制及干扰素抗病毒活性中的作用进行了研究。发现ISG15及USP18不仅刺激HCV 复制而且抑制干扰素抗病毒活性 (Randall & Chen, et al. Gastroenterology 2006; Chen, et al. Journal of General Virology 2010)。这可以一定程度解释为什么HCV感染后，肝组织内ISG高表达预示病人对干扰素治疗无效。
免疫组化研究表明， 这些ISG不仅表达水平有差异，而且表达具有细胞特异性，即在不同细胞内表达与干扰素治疗效果密切相关。如果ISG主要在肝细胞内表达，病人对干扰素治疗无效，如果主要在巨噬细胞内表达，则90%以上的病人对干扰素治疗敏感 (Chen, et al. Gastroenterology 2010)。最近通过全基因组关联分析，发现IL28B SNP与HCV感染后病毒的自然清除及干扰素治疗效果有关。但我们的研究表明，基于ISG在肝组织内不同细胞表达预测干扰素治疗丙肝疗效较IL28BSNP预测疗效更加准确 （McGilvray, et al. Gastroenterology 2012 in press）。
丙型肝炎预防和治疗性疫苗
丙型肝炎病毒感染是终末期肝病的主要原因之一。献血员的筛查显着降低了血液传播，但是，已经感染的人群是主要的传染源，不安全注射，费清洁牙科操作、纹身、透析等成为新的主要的传染源。
这些都需要预防性疫苗。聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗可使高加索和亚裔人分别获得50%和75%的程序病毒学应答，直接抗病毒药物（DAA）进一步提高程序病毒学应答，但DAA也带来了更多的不良事件和耐药。即便如此，仍然有无应答和复发者。因此，治疗性疫苗仍然有潜在的临床应用价值。
预防性疫苗研究的主要障碍是HCV病毒易突变，逃逸已经出现的中和抗体。缺乏良好的细胞和动物模型也是障碍之一。治疗性疫苗的策略主要有四点，载体疫苗、DNA疫苗多肽疫苗和重组疫苗。载体疫苗可诱导特异性的CD4+ 和CD8+ 的T细胞应答。体内外研究都显示，MVA 载体可表达HCV NS 3, NS4 和NS5B,转基因鼠研究显示可诱导特异性的CD4+ 和CD8+ 的T细胞应答。I期临床试验在15例患者中进行试验，6例出现HCV载量下降。DNA疫苗主要包含NS3和NS4A， 可在体外有效诱导对NS3和NS4的应答，12例患者的临床试验安全。接受最高剂量（150微克）的3例患者中，2例患者出现病毒载量下降。肽疫苗主要采用核心区，NS3和NS4，但是，在诱导出现CD4+ 和CD8+ 的T细胞应答的同时至出现微弱的病毒载量的下降。酵母表达的重组疫苗包含了NS3和核心区融合蛋白，在体外诱导出现很强的Th1应答，在体内也可出现应答。
细胞治疗肝硬化和肝癌的基础和临床应用研究
钱程指出，细胞生物治疗作为新型治疗手段所取得的疗效已受到人们的重视。内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs）是一种具有双向分化潜能并可参与新血管生成和组织的中胚层前提细胞。EPCs能够参与血管损伤修复和具有组织损伤修复功能。
钱程带领的课题组研究表明，在肝硬化发生过程中，组织损伤释放的趋化因子能够有效募集EPCs进入肝脏。EPCs对多种因素引起的肝损伤和肝硬化具有保护和修复功能。EPCs治疗能显著降低肝硬化的发生。
对于肝癌的细胞生物治疗，由于肝癌患者体内存在免疫抑制环境，治疗细胞功能的发挥受抑制，治疗效果有限。因此在临床治疗时，需降低肿瘤负荷，采取多次输注的方式进行治疗。为增强免疫细胞的治疗效果，钱程带领的课题组和国内外科学家相继提出免疫细胞——基因疗法，即采取体外基因修饰的方法，向治疗细胞中导入免疫调节因子如IL-12，通过免疫调节因子的作用，改变体内免疫环境，增强治疗细胞的功能和延长作用时间，提高治疗效果。
