BMC cancer:杀伤肿瘤细胞!----一种非病毒mcDNA介导的双特异性CAR T细胞

肝细胞癌（HCC）是全球最常见的癌症之一，其过继性免疫疗法值得研究。CD133是一种癌症干细胞（CSC）抗原，与glypican-3（GPC3）一起已被证明在HCC细胞中高度表达，并且它们可作为作产生嵌合抗原受体（CAR）T细胞的靶标。但在CAR T细胞治疗中存在“脱靶”毒性，存在低转染疗效和抗肿瘤能力弱等局限性。

近段时间来自中国复旦大学附属中山医院的一个研究团队针对一种非病毒mcDNA介导的双特异性CAR T细胞进行了研究，旨在研究其抑制肿瘤增殖能力。

本研究从健康供体获得外周血，通过密度梯度离心分离T细胞。研究人员使用电穿孔系统将抗CD133和抗GPC3单链片段变量（scFv）结构作为靶基因递送到T细胞中。细胞膜由瞬时电流效应打开，靶基因通过非病毒微圆DNA（mcDNA）载体递送到细胞中。采用流式细胞术和蛋白质印迹法检测两种scFv是否同时转染以及该双特异性CAR-T细胞生成方法的转染功效。再通过CCK-8测定和HCC异种移植小鼠模型分别检测了CAR T细胞的体外和体内肿瘤抑制功效。同时含有CD133和GPC3抗原识别位点的CoG133-CAR T细胞是效应细胞。CD133-CAR T细胞和GPC3-CAR T细胞定义为单靶向对照组，正常T和模拟T细胞定义为空白对照组。

mcDNA载体适应两个成功转染的靶基因结构以产生双特异性CAR T细胞。基因水平和蛋白质水平的检测方法证实，CoG133-CAR T细胞具有较强的转染效率，并表现出CD133和GPC3的抗原结合能力。与单靶点CAR T细胞或对照T细胞相比，CoG133-CAR T细胞在体外对CD133和GPC3双阳性HCC细胞系和体内HCC异种移植小鼠具有增强的消除功效。苏木精和曙红（H&E）染色表明CoG133-CAR T细胞和主要器官上不存在致命的“脱靶”组合。

该研究表明，通过非病毒mcDNA载体制备双特异性CAR T细胞具有更高的效率和安全性。CoG133-CAR T细胞通过双重抗原识别和内部激活增强肿瘤抑制能力。它为肝细胞癌（甚至是实体瘤）的CAR-T治疗提供了一种创新策略。

原始出处：Wang H, Wang X, et al. Nonviral mcDNA-mediated bispecific CAR T cells kill tumor cells in an experimental mouse model of hepatocellular carcinoma. BMC Cancer. 2022 Jul 25;22(1):814. doi: 10.1186/s12885-022-09861-1. PMID: 35879685; PMCID: PMC9310485.