间充质干细胞治疗视网膜变性研究进展
以年龄相关性黄斑变性（AMD）和视网膜色素变性（RP）为代表的视网膜变性疾病是全球性重要的致盲眼病。临床上，AMD分为渗出性（湿性）和萎缩性（干性）两大类。尽管眼内注射抗VEGF药物治疗对干预湿性AMD有一定效果，但对更为常见的干性AMD目前尚缺乏有效治疗办法，加之眼部的特性，使之成为世界性干细胞应用研究热点。与美国以胚胎干细胞（ESC）进行视网膜前体细胞和视网膜细胞分化获得的供体细胞、日本以诱导性多能干细胞（iPSC）来源的视网膜色素上皮细胞（RPE）为主要供体细胞开展视网膜下腔移植不同，我们研究团队以间充质干细胞（MSC）和脂肪来源干细胞（ADSC）为供体细胞，并利用RCS大鼠这种遗传性视网膜变性模型为工具，进行视网膜下腔移植进行研究。本报告结合间充质干细胞的简要介绍，重点报告我们实验室进来研究所取得的进展，特别是MSC和ADSC在RCS大鼠的移植后的存活、迁移、整合、分化情况，以及这些干预治疗的效果和安全性，并对间充质干细胞治疗视网膜变性及其他临床应用进行了预测和展望。
异体间充质干细胞治疗小脑萎缩症的临床经验
疗效良好、副作用小、个性化等优势，使得细胞治疗在临床治疗领域中扮演着日益重要的角色。其中，充满发展前景的干细胞治疗，更成为各个国家和地区医疗机构与药厂关注的重点。来自台湾的李光申教授以幽默的风格介绍了以异体间充质干细胞治疗小脑萎缩症的临床经验。
李光申：异体间充质干细胞治疗小脑萎缩症的临床经验
疗效良好、副作用小、个性化等优势，使得细胞治疗在临床治疗领域中扮演着日益重要的角色。其中，充满发展前景的干细胞治疗，更成为各个国家和地区医疗机构与药厂关注的重点。
来自台湾的李光申教授以幽默的风格介绍了以异体间充质干细胞治疗小脑萎缩症的临床经验。
小脑萎缩症(Cerebellar Atrophy)的全名为「小脑退化性动作协调障碍(Cerebellar Ataxia)」，患者的小脑、脑干和脊髓会产生退化性萎缩。疾病特征是因小脑萎缩、小脑功能不良所引起的缓慢渐进性的共济失调，如走路时步履不稳、肢体不协调；说话时发音含糊不清、无法控制音调；眼球转动不平顺；吞咽困难、进食时容易呛咳等。
在临床上的表现除了以小脑的症状为主外，也有些患者因神经系统其他部位的病变引起其他症状，包括复视、巴金森氏症、肌肉萎缩、四肢感觉异常或肌跃症等。
发病年龄在不同类型的小脑萎缩症稍有不同，一般多半在青壮年20至50岁之间。目前并无有效的治疗方式。
本演讲将分享对于此类患者，经由静脉输注异体间充质干细胞治疗小脑萎缩症之安全性及疗效评估，以及异体间充质干细胞经由规范化生产，成为药物供临床常规使用之经验。
围产期间充质干细胞: 从基础到临床
围产期间充质干细胞（Perinatal mesenchymal stem cells, P-MSC）又称出生相关组织源间充质干细胞，指的是胎盘、脐带、脐带血等围产期组织来源的间充质干细胞，具有广阔的应用前景。我们对人P-MSC的鉴别、分离、培养、产品制备与保存及应用进行了系统研究。
首先建立了从人胎盘、脐带和脐血等组织中鉴别、分离、规模制备出高纯度P-MSC的技术体系，建立了低血清培养技术，冷冻保存技术、发明并构建了P-MSC种子库、产品库、生物学功能综合分析的技术平台。制备的P-MSC具有产量高、纯度高、培养时间短、细胞活力强、安全性好等优点。在此基础上，我们建立《注射用间充质干细胞制造和检定规程》以及多种相关技术标准，获产品执行标准证书。这些标准为国家行业标准的制定提供了依据，为干细胞新药研发奠定基础。
其次，我们系统地研究了P-MSC与骨髓MSC生物学特性和功能的异同，发现P-MSC与骨髓MSC有类似特性，但增殖分化能力更强，免疫原性更低，具有很好的造血支持、免疫调节以及组织修复与再生功能，其机制与P-MSC分泌众多因子和PGE2等有关。P-MSC不具致瘤性, 也无明显促瘤性, 对白血病生长有抑制作用。由于胎盘脐带取材方便，P-MSC的提取和应用系变废为宝且不存在伦理问题，特别易于产业化操作。
随后，我们对P-MSC的治疗潜能进行了探索性研究，发现P-MSC对血液病，自身免疫性疾病、糖尿病、心脏病等疾病有治疗潜能，其机制与MSC免疫调控，支持造血，促进血管新生和组织修复有关。对一些重症患者开展了实验性治疗研究, 已经取得的资料表明P-MSC安全性和疗效良好，为进一步的大样本随机对照临床研究的开展奠定了基础。
间充质干细胞的免疫调解机制及临床应用
间充质干细胞（MSC）具有低免疫原性及向缺血或损伤组织归巢的特征,输入宿主体内后,可归巢于特定部位,在微环境影响下定向分化为内胚层、中胚层以及外胚层3个胚层来源组织的细胞,如骨、软骨、肌腱、脂肪、肝、肾、皮肤、肌肉、神经甚至胰腺等10余种成熟细胞.因而成为再生医学中器官修复的理想种子细胞。近年来研究发现除多向分化潜能外，MSC还具有较好的免疫调控作用，主要免疫调控机制为1）抑制T细胞增殖,诱导T淋巴细胞亚群由Th1、Tc1向Th2、Tc2极化；2）抑制DC细胞成熟与分化,减少DC细胞IL-12及TNF-α的分泌；3）上调CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞,诱导免疫耐受；4）抑制细胞毒T细胞,避免或逃逸被细胞毒T细胞和NK细胞攻击。基于对其作用机制的明确及体外细胞水平和动物模型水平的研究基础，目前已有较多应用MSC于异基因造血干细胞移植后的移植物抗宿主病（GVHD）的防治；再生障碍性贫血(AA)、系统性红斑狼疮及多发性硬化等自身免疫性疾病的治疗的临床研究。
在GVHD防治方面，迄今为止在Clinical. trial 登记的临床研究有近20项；初步的结果显示了较好的安全性和有效性，可显著降低GVHD发生率，减少移植相关死亡率（TRM）,但Katarina Le Blanc于2008年发表在Lancet上的一项多中心研究提示早期预防性输注MSC也可增加白血病复发风险，目前多数研究者倾向于将MSC用于激素耐药或难治性GVHD的治疗，我们采用供者或第三方来源的的骨髓MSC每周一次静脉输注治疗了20例移植后GVHD患者[平均输注量:0.8 (0.23~2.1)×106/kg;平均输注次数3(1-5)次],结果治疗组总体有效率(CR+PR)达70%;且发现MSC对移植后肝脏GVHD及皮肤GVHD疗效更为显著，而并不增加疾病复发风险;另外第三方供者的MSC联合脐血干细胞输注对移植后造血恢复不良也有较大改善。
再生障碍性贫血（AA）是一类T细胞介导的骨髓造血衰竭性疾病，目前临床除部分患者采用骨髓移植或强化免疫抑制治疗外并无更好的方法，我们的研究发现AA患者血浆及外周血CD3+,CD8+细胞内IFN-γ,TNF-α高表达；骨髓液及血清中游离TNFR1、TNFR2等负调控因子水平也较高；AA患者T细胞亚群的异常除CD4+T/CD8+T细胞；Th1/Th2细胞失衡外，还存在CD4+CD25+FoxP3+Treg表达减低；另外也发现DC1与成熟DC1的失衡可能在AA发病环节中具有重要作用。早期的动物模型研究证实了免疫细胞治疗可促进经放射造模的骨髓衰竭小鼠造血恢复,并证实其机制为抑制DC细胞成熟与分化,减少DC细胞IL-12及TNF-α的分泌，体外细胞实验则证实MSC可抑制AA患者外周血T细胞增值；下调AA患者GATA-2、PPARγ表达及BMNC凋亡率；上调AA患者外周血CD4+CD25+FoxP3+Treg的表达；经总结我们在Clinical trial 登记的关于MSC治疗AA的前瞻性多中心的临床研究，25例的初步结果显示：BMSC输注射治疗AA可上调其Treg水平，与传统IST相比，总有效率更高，安全性好，长期疗效及不同类型AA的疗效差异有待扩大病例数进一步研究。
MSC对其它自身免疫性疾病如多发性硬化也有较好的疗效，小样本的临床研究与传统激素治疗相比，MSC治疗可减少疾病复发，无明显毒副作用。
总之，由于MSC与T、B淋巴细胞、NK细胞、DC细存在交互作用的免疫调控作用，其在白血病移植后GVHD、AA、多发性硬化等自身免疫性疾病方面有较大应用前景，值得进一步深入研究。
骨髓间充质干细胞治疗矽肺的基础与临床研究
较石英尘和博来霉素诱导的大鼠肺纤维化模型，我们发现，1.共同点：两种模型的肺泡炎和肺纤维化程度均随时间逐渐变的更严重，最终结局均为肺组织纤维化。2.不同点：BLM组14d时肺纤维化最严重，而SiO2组7d时纤维化与对照组同期相比无统计学意义。 免疫组化显示TNF-α表达量在BLM组7d时最高，在14d时SiO2组高于BLM组；CD68表达量在SiO2组14d时最高，在BLM组7d时低于本组14d时，低于SiO2组同期。TNF-α和CD68表达量在SiO2、BLM两组各时段均较对照组高。
在动物研究基础上，我们做了初步临床研究。2008年10月至2010年5月对10例矽肺患者采用自体BMSCs移植治疗，其中7例患者采用单独自体BMSC移植治疗，3例患者（Ⅱ期1例，I期2例）采用肝细胞生长因子（Hepatocyte growth factor,HGF）基因修饰的自体BMSCs治疗。结果：
1.临床症状改善情况：治疗后观察患者6～9个月，所有患者咳嗽、咳痰、胸闷、气紧等呼吸系统症状基本消失。
2．血清CP和IgG水平的变化：治疗后血清CP和IgG水平下降明显，与治疗前比较差异有显著性意义。
3．T细胞亚群变化：治疗后T细胞亚群变化与治疗前比较差异无显著性。
4．肺通气功能变化：治疗后FVC、FEVl.0有明显增加，与治疗前相比差异有显著性。
思考与展望：
1. 通过内源的、外源的甚至经过基因修饰的干细胞使组织再生，是一个很有前途的新的治疗方法；
2. 矽肺的发病机制非常复杂，故其治疗的难度很大。建议开展多环节的防治合作。
自体骨髓间充质干细胞移植治疗乙肝肝衰竭
本课题组自2005年开始进行自体MSCs移植治疗乙肝肝衰竭的研究，我们发现：移植手术成功率100％，未出现严重不良反应及并发症。自觉症状如食欲等有改善，术后一到四周，治疗组肝功能恢复较对照组好，ALB、TBIL从术后第二周开始，手术组的改善明显超过对照组；从PT和MELD评分来看，从术后第三周开始，手术组的改善明显超过对照组。
另外，移植组患者MELD评分的显着改善最长可持续至术后第36周。而在最短3个月，最长48个月的长期随访观察中，我们发现：治疗组与对照组的肝癌发生、死亡情况之间均无显着性差异--并未能显着改善乙肝肝衰竭患者的长期预后；但是在移植组中，肝硬化患者与非肝硬化患者的肝癌发生、死亡情况之间亦无明显差异（肝硬化是肝癌的高危因素之一，也是导致乙肝患者死亡的高危因素之一）--该结果说明：自体MSCs移植安全有效，并可能对于肝硬化患者存在更积极的良性作用。
脐带间充质干细胞生物学特性及应用
开展脐带血造血干细胞治疗技术的，应有质量控制和质量评价措施的实验室或者有固定协作关系的实验室，能够进行脐带血造血干细胞活性检测、有核细胞计数、CD34＋细胞计数和HLA组织配型，具备免疫抑制剂的血药浓度监测能力。
间充质干细胞：一把双刃剑，在调节免疫反应
间充质干细胞（MSCs）是在机体内广泛存在的一种具有多向分化潜能的组织干细胞。更由于其具有重要的免疫调节作用而受到重视，近些年来在疾病模式动物模型和临床研究上MSCs被尝试应用于治疗免疫紊乱疾病。尽管有不少文章报道称MSCs有非常良好的治疗效果，但是其治疗适应症、诊疗时机选择和作用机制等有待进一步研究。