质粒DNA的提取、纯化与鉴定
本课程是由南方医科大学基因工程研究所生物化学与分子生物学实验教学中心提供的,内容主要讲述了质粒DNA的提取、纯化与鉴定的实验原理及实验材料方法和实验步骤
2014-10-11 课时:13分钟
质粒克隆
闭环质粒被一种或几种限制性内切核酸酶切割后与具有相匹配的末端的外源DNA在体外连接,连接反应的产物即可用于转化合适的E.coli菌株。通过PCR、杂交或限制性内切核酸酶消化筛选具有目的DNA序列的克隆。
2015-02-26 课时:5分钟
质粒纯化
质粒纯化是将质粒DNA与基因组DNA、蛋白质、核糖体以及细菌细胞壁分离开的一种技术。质粒是小的环状双链DNA,用作特定DNA分子的载体。当质粒通过转化技术导入宿主细胞后,将被复制产生大量拷贝的DNA片段用于研究。
本短片讲述了常用的质粒纯化的逐步过程。质粒纯化包括三个基本步骤:细菌的培养,细菌的收集和裂解,质粒DNA的纯化。视频还解释了操作过程每一步中质粒在哪里会被发现,以及如何用分光光度计和电泳对质粒进行定量和纯度的分析。目前有多种质粒纯化的方法,可以根据所需质粒的产量,质粒的拷贝数目和细菌培养的体积来进行选择。
2015-12-19 课时:9分钟