张志英：骨髓神经组织定向干细胞的来源、分离、培养及在周围神经的应用
张志英，博士，硕士生导师，副教授，现工作于第二军医大学解剖学教研室暨生物医学工程研究所暨再生医学研究中心。主要从事脊髓损伤及周围神经再生修复的干细胞治疗等研究。
骨髓内除造血干细胞及基质干细胞外， 另有极小胚胎干细胞（very small embryonic-like stem cells，VSEL)、多潜能干细胞（multipotential adult progenitor cells ，MAPC)， 以及CXCR4 阳性的组织定向干细胞（tissue-committed stem cells，TCSCs）包括骨骼肌、心、肝及神经组织定向干细胞（neural tissue-committed stem cells，NTCSCs）等的报道，骨髓基质干细胞是一类异质性干细胞， 并具有多向分化的潜能， VSCL、MAPC、TCSCs、NTCSCs 等是骨髓基质干细胞内的亚细胞群还是独立的细胞群？
有关这个问题目前仍有争议，目前的研究是否为从不同的角度研究着同一类细胞？我们通过先贴壁、后悬浮的方法从骨髓中分离、培养了神经组织定向干细胞，并通过免疫组织化学、流式细胞仪、电镜、PCR 等方法对其进行了鉴定。
我们应用骨髓源性神经组织定向干细胞或其分化的神经元移植或构建组织工程神经修复大鼠、兔及犬的长段坐骨神经缺损，探讨其修复神经功能的作用及机制。
神经组织的组织学染色
为了检测组织和器官中的细胞，结构和分子的布局，研究人员使用一种被称为组织学染色的方法。在该技术中，感兴趣的组织被用化学固定剂保存并切片，或切成非常薄的切片。然后应用各种染色技术为这些看起来均一的切片提供对比度。在神经解剖学的研究中，组织学技术被经常用来观察和研究神经系统组织。
这段视频着重于神经组织的组织学染色技术。概述了常见的大脑组织染色，包括那些特异性标记神经元细胞体的方法，如尼氏染色，和那些有选择地突出显示髓鞘化的轴突的方法，如罗克沙尔固蓝染色。还讨论了免疫组化技术，该技术利用抗体和特定细胞蛋白之间的特异性相互作用。接下来，描述了制备用于染色的脑组织样品，包括固定，包埋，切片和复水组织的基本步骤。本短片还提供了免疫组织染色后进行尼氏染色的逐步过程，以及这些技术的实际应用。
神经组织的外值体培养
脊椎动物神经系统的精细结构产生于一系列涉及细胞分化，细胞迁移和细胞形态变化的复杂事件。研究这些过程对于我们了解神经系统功能，诊断和治疗发育异常导致的疾病极为重要。然而，神经组织相对无法得到实验处理，尤其是在哺乳动物的胚胎内。因此，许多科学家利用外植体培养，来在"器官型培养"的环境下研究神经发育过程，也就是将组织从生物体中取出，但仍保留其复杂的细胞结构。概括地说，获得外植体培养物就是仔细分离出神经组织，然后将其浸没在精心设计的生长培养基中，进行体外培养。
本短片将首先简要介绍神经外植体培养，包括它与其他体外方法相比的优势，和维持健康组织的重要考虑因素。接着，提供了一个从胚胎小鼠大脑建立起外植体培养的通用方法，概述从母体上分离胚胎和解剖大脑过程。本短片还包括了薄片培养的介绍，用该方法得到的神经系统的薄切片使得能更容易地观察发育中的细胞。最后，将演示这些技术的一些应用以说明它们是如何被用来回答神经发育领域的重要问题的。