基本的组织培养:细胞传代
生物医学实验中常常会用到细胞系,因为它们可以快速生长和扩增提供实验分析要用到的细胞。细胞系与新分离的或原代细胞的培养条件相类似,但也有一些基本不同的地方:(1)每个细胞系需要其特定的生长因子混合物(2)与原代细胞相比,它们的生长需要更严密的监测,因为使它们无限生长的突变同时也会造成它们很快达到过度生长。因此,当细胞系生长到了几乎覆盖整个培养器皿底部,也就是90%的密度时,细胞需要重悬洗涤用于实验或冻存以备将来使用,或者重新接种到新的培养器皿进一步扩增。
本短片将演示如何使用培养液指示剂来判断细胞培养的健康程度,安全转移贴壁细胞所需要的试剂和仪器,并将讨论转移这些快速增殖的细胞到新培养液中的不同方法。还将同时演示如何培养饲养细胞(这对提供细胞必需的生长于因子很重要)和如何大规模培养细胞系的方法。
酿酒酵母的培养和保存
在酿酒酵母中进行的研究极大加深了我们对一些重要细胞进程,如细胞周期调控,衰老和细胞凋亡的了解。使用酵母做研究对象的其他好处还包括,它们在实验室培养的成本低廉,许多可直接用于研究的菌株已经商品化。然而,对该生物的正确保存对实验成功极为关键。
本短片将全面讲述如何在实验室培养和保存酿酒酵母。将讲解检测酵母数目扩增所需的一些基本知识,例如使用分光光度计得到生长曲线。本短片还将演示在 实验室保存酿酒酵母要用到的实际操作技术,包括培养基的准备,如何开始新的酵母培养,和如何保存菌株。短片最后还将展示将这些操作和保存技术用于科学研究中的例子。
果蝇的饲养与保存
黑腹果蝇,又称果蝇, 是生命科学研究中常用的一种模式生物。 尽管开始培养这些小生物看起来就象只需在你的厨房桌面上长久放置一根香蕉那么简单,在实验室培养繁殖旺盛的果蝇品系事实上需要谨慎的饲养和保存。
本短片演示了保存健康果蝇品系的必须步骤。先介绍了配制和保存含酵母膏和糖分的培养基,也就是果蝇的食物。然后演示了培养果蝇常用的器皿,以及如何和何时将果蝇从不同器皿中转移。最后短片还举例说明怎样根据生物实验对培养器皿和食物条件进行调整。
秀丽隐杆线虫的实验室基本培养
秀丽隐杆线虫作为一种模式生物,曾经并且依然在研究发育,遗传,分子甚至生理现象等不同领域上发挥着重大作用。为了有效利用线虫的全部潜能,尤为关键的是 正确小心地对该功能强大的模式生物的基本培养。本短片中,您将学习到线虫培养所需的基本饲养容器和食物,如何用挑针正确操作和处理线虫,如何冻存和复苏线 虫。在视频的最后我们将了解一些调整饲养容器,食物和处理线虫的实际应用。
小鼠的操作和养护的基本知识
小鼠(小家鼠)是能很快繁殖并性成熟的小啮齿动物,这使得它们非常适合在生物研究中用于生成大量动物克隆。与其他哺乳动物类相比,小鼠在实验室的保存简单且低廉。但是,特别小心地饲养小鼠克隆十分重要,它可以保证动物的健康和安全,以及实验的重复性。
本短片演示了在实验室动物饲养房尽可能人性化处理小鼠的标准操作程序。讨论部分先温习了一个普通小鼠饲养笼的装置,它包括一个铺有一层软物和做窝材料的塑料笼子。还会介绍构成小鼠主要食物的预制食物片(被称为饲料)。为方便小鼠实验,还将演示安全操作动物的实践过程,包括常用的固定技术如"抓颈部",和研究人员在饲养房记录每个小鼠的办法。最后将讨论对小鼠住所和喂食的实验改动,以及"抓颈部"技术的最常见应用--进行注射。
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斑马鱼的保存和饲养
斑马鱼是一种功能强大的脊椎动物模型,它用于研究发育过程、建立疾病模型和筛选新的药物。由于它们的个体小,可以在实验室内低成本地饲养大量的斑马鱼。尽管斑马鱼的保存相对容易,但为了使它们的健康和繁殖成功率达到最佳,仍需要特别注意其食物和水质。
本短片概述了斑马鱼在实验室的饲养和保存。在简单介绍斑马鱼的自然习性之后,将讨论如何在实验室中再建这种环境的关键技术,包括养鱼设施的水循环系统和准备丰年虾作为斑马鱼的部分食物。另外,本教学片还包含了在实验室如何记录特殊的斑马鱼品系的内容,主要提到了收集斑马鱼尾鳍进行DNA提取和基因型鉴定。最后还将讨论对斑马鱼的生活环境进行实验条件变动,以此来深入了解这些鱼类,进而了解我们自己。
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鸡胚的去壳培养
鸡(家鸡)作为发育生物学的模式生物的一个优势是胚胎的发育在母体之外,并能方便地进行实验操作。许多技术可以使科学家对壳內的鸡胚进行研究,但它们对发育晚期的胚胎操作受到一定限制。值得庆幸的是,鸡胚还可以在壳外,也就是去壳进行培养。去壳培养的一个好处是能方便接触到组织,否则尤其是对于晚期发育阶段的胚胎,由于蛋壳的存在或鸡在蛋壳内的位置无法接触这些组织。
去壳培养有两个主要的方法:全蛋黄培养和移植培养。全蛋壳培养时,蛋壳被敲碎,里面的内容会被转移到一个简单的培养容器中。而在移植培养方法中,胚胎会从蛋黄中分离出来并固定在培养容器中来维持膜的张力,它对于正常发育很重要。
本短片将给出全蛋黄培养和移植培养技术的基本操作步骤,并将讨论在蛋壳外培养鸡胚的好处和坏处。最后,还会讨论到去壳培养的实验应用,演示如何用该技术来帮助显微观察胚胎和基因操作晚期胚胎。
原代神经元培养物
大脑的复杂构造使得神经科学家们通常需要使用一个简单的系统来进行实验操作和观察。一种有效的方法是获得原代培养物,即解剖神经系统组织,将其解离成单细胞,再在体外培养这些细胞。原代培养物使得能方便地对神经元和神经胶质细胞进行遗传操作和延时成像等必要的实验手段。此外,这些培养物还提供了一个可完全控制的环境,能用于研究复杂的现象,如细胞间的相互作用。
本短片概述了得到原代神经元培养物的主要步骤,包括选择和解剖感兴趣的组织,机械和化学分解组织以产生单细胞悬浮液,将细胞铺板,以及在适当的培养液中维持培养物。短片还介绍了几个典型实验,以显示如何使用培养的细胞来研究在活神经元中蛋白质的运输,形态的变化,及进行电生理学研究。
神经组织的外值体培养
脊椎动物神经系统的精细结构产生于一系列涉及细胞分化,细胞迁移和细胞形态变化的复杂事件。研究这些过程对于我们了解神经系统功能,诊断和治疗发育异常导致的疾病极为重要。然而,神经组织相对无法得到实验处理,尤其是在哺乳动物的胚胎内。因此,许多科学家利用外植体培养,来在"器官型培养"的环境下研究神经发育过程,也就是将组织从生物体中取出,但仍保留其复杂的细胞结构。概括地说,获得外植体培养物就是仔细分离出神经组织,然后将其浸没在精心设计的生长培养基中,进行体外培养。
本短片将首先简要介绍神经外植体培养,包括它与其他体外方法相比的优势,和维持健康组织的重要考虑因素。接着,提供了一个从胚胎小鼠大脑建立起外植体培养的通用方法,概述从母体上分离胚胎和解剖大脑过程。本短片还包括了薄片培养的介绍,用该方法得到的神经系统的薄切片使得能更容易地观察发育中的细胞。最后,将演示这些技术的一些应用以说明它们是如何被用来回答神经发育领域的重要问题的。