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illumina测序化学原理 - 陈巍学基因（1）

本期课程介绍Illumina测序的化学原理。

包括文库（library）、芯片（flowcell）、桥式PCR、双端测序。

2014-12-18 课时：14分钟

李智医师从POCT的定义、技术发展、临床应用现状、存在的问题及解决对策等方面进行了深入浅出的论述，并就"基于纸质的ECL 3D 检测肿瘤标志物CEA检测"技术进行了详细介绍。

李智介绍道，POCT具有简便快捷的特点，同时，为了满足临床需要，POCT享有一定程度的"临床豁免权"，也就是说在检测过程中，POCT不需要操作者干预，不需要技巧或专门知识，无需电子或机械设备保养，所得结果不需要操作者校准、解释和计算。

目前POCT产品已经在临床中发挥了重要作用，特别是在心血管疾病诊断、口服抗凝药检测、抗血小板药物选择、新生儿微量血样检测、微生物与毒品检测、早孕检测等领域取得了重大进展。

（1）在儿科的应用：其优点是不言而喻的，儿童和成人的就诊方式完全不同，适合儿童的诊断行为需要轻便，易用，样本需求量少，样本无需预处理，快速得出有效的诊断结果。同时缩短就诊时间和父母的满意度也很重要，POCT基本可以达到上述目的。

（2）在心血管疾病上的应用：美国临床生化科学院关于冠心病时心肌标志物的应用建议中已明确将POCT的使用和注意事项写进条款。如："11为了缩短分析前的检测周转时间（TAT），检测标本应选择肝素抗凝的血浆（血清和血浆检测旨果无明显差异分析测定时间应<30分钟。

（3）血液学：POCT在血液学方面主要是凝血机制检测；如口服抗凝血治疗（oralanticoagulation therapy），心脏手术进行时的凝血监测，肺部血栓和深层静脉血栓的诊断，如：PT，APTT。Fib，D -dimer的检测，最新又出现POC血小板功能检测仪（POC Platelet Function Measuring Devices），快速检查血小板功能。

（4）微生物与毒品检测：POCT在诊断微生物方面要比传统的部养法或染色法快速和灵敏得多，这可以让那些私人诊所或不具备条件的社区医疗机构也能快速得到诊断结论，帮助医生们确定病情。此外，对于海洛因、可卡因、大麻、安非它命等毒品，POCT技术能在短时间内筛选大量样本，可以广泛用于公安部门，社区医院，戒毒中心，运动会等机构和活动。

（5）POCT在急诊医疗中的作用：2012年澳大利亚奥斯汀医院重症监护室的一项前瞻性一个研究，即通过采用POCT检测方法对急救医疗队送来的呼吸困难的患者行多项生物标志物（包括BNP、D-dimer、CK、CK-MB、TnI）的快速检查用于评估预后价值。结果发现：尽管BNP和D-dimer阳性并不能完全判断这些患者入住ICU或住院死亡率，但正常水平的BNP和D-dimer可以排除其入住ICU和入院死亡。

（6）POC基因检测有日趋广泛应用的趋势：如采用新式POC基因检测方法鉴定CYP2C19 * 2等位基因携带者用于评估PCI后是否需要使用双重抗血小板药物治疗，结果显示PCI后采用POC法基因检测能有效的在床边鉴定CYP2C19 * 2等位基因携带者并用普拉格雷治疗降低治疗后的血小板高活性，即POC检测开启抗血小板个体化治疗的大门。

此外，今年POC均相荧光传感器检测血清白蛋白; 带内标微型蛋白芯片-POCT法检测新生儿败血症; 快速等温扩增技术快速诊断HIV和结核；芯片兼容的样品制备在感染性疾病诊断，即基于微流体的诊断技术用于感染性疾病诊断，如采用液流芯片技术在呼吸道标本中扩增甲流RNA；采用应用型专用集成电路读数仪快速检测心脏标志物等等最新的POC分子诊断技术不断见诸于各类医学期刊，都展示了POC技术的发展趋势。

在快速发展的同时，POCT也存在一些亟待解决的问题。如对于操作人员没有健全的管理制度，缺乏严格的质量控制，检验成本偏高，检测报告不规范等问题。李智医师认为，只有坚持以病人为中心，对POCT实施全面、规范的质量管理、加强医师、护士及相关人员培训，方能使POCT健康地造福于社会。而POCT技术在检验医学快速发展的今天，也一定会在"逆境中"不断壮大成长。