质粒DNA的提取、纯化与鉴定
本课程是由南方医科大学基因工程研究所生物化学与分子生物学实验教学中心提供的,内容主要讲述了质粒DNA的提取、纯化与鉴定的实验原理及实验材料方法和实验步骤
GE公司His标签蛋白纯化预装柱HisTrap™ FF Crude使用技巧
主要介绍了His标签蛋白纯化预装柱HisTrap™ FF Crude的实验过程,原理,说明,一般事项,样品制备,纯化操作, 按比例放大, 柱的清洗及保存等。
简单高效的磁珠纯化
Mag Sepharose 磁珠非常适合用于小规模纯化实验, 满足简单快速样品前处理的需求 ,用于纯化抗体、His标签蛋白,免疫共沉淀或pull-down实验。 高密度磁珠配合磁架使用快速捕获目标物,磁珠的可见性确保在整个纯化流程中可靠的收集目标物。能更加简单,节省时间和得到高质量的结果。
生物药制造纯化技术进展与趋势
随着越来越多的生物药物得到批准和投入生产,临床使用剂量达到数十至数百毫克,对生产制造纯化工艺的效能和成本要求也越来越高。生物技术药物产业的发展对生产制造规模和产品纯度指控量的要求也越来越严格。模仿文献案例的一般策略难于实现生物技术药物研发与制造的超越。利用生物识别性质的差异的亲和纯化技术, 其高度选择性质具有纯化效率(纯化倍数)高、纯化步骤少、重复性好、操作简单的优点是在制造水平提高生物仿制药竞争力的有力手段。
稳定的小分子仿生亲和配体,能够保持传统亲和技术的优点,又具有稳定性好,制备便宜的特点。不仅能够提供高效的纯化倍数、重复性的结果,而且配体极少脱落。这种仿生亲和分离技术是至今为止最有效的高纯生物活性产品的工业化大规模生产技术。生产中可以减少纯化步骤, 缩短生产周期,降低生产成本, 提高生产效率。将在生物技术药物制造纯化方面发挥重要作用。此外对背景蛋白在各种纯化步骤中效果的研究与数据积累,也有助于在项目设计阶段提高研发的效果, 缩短研发工作周期,有可能带来创新的思想方法与突破性研究策略。
抗体纯化工艺开发
中国的单克隆抗体产业高速发展,对于质量的要求也迅速提高。虽然抗体纯化的平台技术得到了广泛的应用,在具体的纯化过程中仍存在着各种难题,其中聚体的去除在单克隆抗体生产的纯化工艺是非常关键的。阳离子交换层析则是去除聚体及其它与工艺和产品相关杂质的重要手段。
我们利用了QbD(质量源于设计)的原理,开发了阳离子交换层析去除聚体的工艺。首先对多种层析填料进行了筛选以确定适合的填料,然后对pH和电导的洗脱条件进行了优化。通过风险分析确定关键的工艺参数,并就这些参数对产品质量的影响(如聚体的去除)进行了研究。进而完成了设计空间。最后进行了工艺放大,并在三批连续生产中实现了>99%的纯度,证实了工艺的稳定性和可靠性。
KrosFlo 中空纤维过滤组件 - 卓越性能,优化澄清、浓缩及纯化工艺
改性聚醚砜(mPES)是一种新型亲水性膜过滤材料,可提供更高的过滤通量,从而缩短过滤时间。与其它膜材质相比,它具有更出色的分离选择性以及更低的蛋白结合率,产品收率更高。mPES中空纤维膜的无缝结构增强了膜的抗张强度,工艺寿命更长。
仕必纯新型改性聚醚砜中空纤维过滤器具有改性聚醚砜的所有性能优势。切向流过滤(TFF)的关键是料液在中空纤维膜表面的循环流动对膜表面带来的清洗效果。使用mPES中空纤维过滤器进行切向流过滤,相比膜包或死端过滤器等,优势明显。温和的错流进样可减缓过滤时膜孔堵塞,并可维持较高的过滤通量,保证产品收率。
在细胞治疗领域,切向流过滤可用于慢病毒载体的高倍浓缩以及治疗性细胞的漂洗以及浓缩、换液。
凝胶纯化
胶纯化用于回收电泳分离的DNA片段。从琼脂糖凝胶中回收DNA包括三个基本步骤:在硅胶柱上进行结合,清洗和洗脱。高盐环境下,DNA会通过盐桥结合到硅胶上,清洗掉不纯的物质后,再用低盐条件破坏这种相互作用从而将DNA洗脱下来。
本短片讲述了常用胶回收的基本步骤,从胶中将DNA带切割出来,溶解胶,用硅胶柱结合并洗脱下纯化的DNA。此外,该短片还讨论了要保证胶回收成功的几个技巧,包括跑胶中用上已知分子量大小的DNA标准样的重要性。
质粒纯化
质粒纯化是将质粒DNA与基因组DNA、蛋白质、核糖体以及细菌细胞壁分离开的一种技术。质粒是小的环状双链DNA,用作特定DNA分子的载体。当质粒通过转化技术导入宿主细胞后,将被复制产生大量拷贝的DNA片段用于研究。
本短片讲述了常用的质粒纯化的逐步过程。质粒纯化包括三个基本步骤:细菌的培养,细菌的收集和裂解,质粒DNA的纯化。视频还解释了操作过程每一步中质粒在哪里会被发现,以及如何用分光光度计和电泳对质粒进行定量和纯度的分析。目前有多种质粒纯化的方法,可以根据所需质粒的产量,质粒的拷贝数目和细菌培养的体积来进行选择。
GE:重组标签蛋白纯化策略与方法
生物分子的分离纯化是获得有效生物产品的重要环节之一。在纯化过程中需要考虑目的物性质,合理选择及组合具有各自特点及优势的层析技术,才能达到最优的纯化效果,满足目标产品产量、纯度等多方面的要求。自世界上第一款凝胶过滤填料诞生开始, GE公司作为蛋白分离纯化领域的专家,始终和您站在一起。“如何综合安排纯化策略?如何有机运用纯化方法?如何灵活优化纯化条件?”在这个讲座中,我们将探讨这些重组标签蛋白纯化工作中的重点和难点。