Molecular Therapy Nucleic Acids: MiR-17通过负性调节miR-17-92簇发挥肿瘤抑制作用

甲状腺间变性癌(ATC)是一种侵袭性、高转移性的癌症，表达高水平的microRNA(MiR)17-92簇。作者利用miR抑制系统，基于ATC SW579细胞系中种子序列的同源性，研究了miR-17-92簇内不同miR的功能。虽然四个miR-17-92家族中有三个是致癌的，但作者发现了miR-17在体内外作为肿瘤抑制因子的新作用。

图片来源: https://doi.org/10.1016/j.omtn.2021.10.021.

人类13号染色体上的miR-17-92簇：miR17HG被表达为单个转录本，然后被加工成六个成熟的microRNA(miR-17、miR-18a、miR-19a、miR-20a、miR-19b和miR-92)。miR-17和miR-20a具有相同的种子区序列，如domir-19a和miR-19b，而miR-18a和miR-92a。 PMIS系统可用于通过种子序列识别来特异性地抑制靶miR功能。

为了抑制miR-17-92簇中不同的miR，设计了不同的PMIs结构来靶向miR-17、miR18a、miR-19a和miR-92a-1的种子区，并用表达GFP的PMIs慢病毒构建体感染SW579，建立了稳定的细胞系。作为对照，作者用表达pMIs空载体的SW579细胞系作为对照，该空载体不抑制miR功能。

通过将miR-17-92成员的结合位点克隆到psiCHECK-2荧光素酶报告基因的30UTR上，构建了荧光素酶报告基因，用来检测miR-17-92成员的活性。SW579细胞内源性高表达miR-17-92簇和单个家族成员。在表达非特异性pMIS载体的SW579细胞中，与缺少miR-17结合位点的报告相比，添加miR-17结合位点的报告导致归一化信号减少90%。

在确认每个稳定细胞系的miR抑制后，将每个细胞系的形态与表达非特异性PMIS载体的SW579细胞进行比较。作为生长对照，SW579、SW579-PMIS-载体和SW579-PMIS-miR-17细胞在生长12h后出现。表达pMIS载体pMIS-miR-18a、pMIS-miR-19a、n dPMIS-miR-92a-1的细胞在培养96h后细胞形态保持不变。

为了确定抑制miR-17的作用是否针对SW579细胞，我们还建立了稳定表达pMIS载体pMIS-miR-17的MDA-T32甲状腺乳头状癌细胞系。增殖实验表明，抑制miR-17对MDAT32细胞的增殖也有促进作用，而稳定表达pMIS-载体的细胞与亲本细胞的增殖没有差异。

作者对显示抑制miR-17促进肿瘤生长的活体结果感到惊讶。已有研究表明miR-17高表达可引起肿瘤，并已被用作肿瘤的生物标志物。然而，也有研究表明其他miR-17-92家族成员与肿瘤进展有关。为了确定miR-17-92簇中的其他miR是否因miR-17的抑制而增加，设计了引物来探测pri-miR-17-92簇转录本的不同区域。

有趣的是，在表达PMIS-miR-17的SW579细胞中，每个用于测量其表达的引物组检测到更多的pri-miR-17-92簇，这表明miR-17调节pri-miR-17-92簇的转录。此外，抑制miR-17的活性会导致成熟miR-18a、miR-19a和Asmir-92a的表达增加。

MiR-17作为变阻器调节ATC细胞中miR17-92簇的表达

图片来源: https://doi.org/10.1016/j.omtn.2021.10.021

这些数据表明，miR-17在ATC中的作用不同于miR-17-92簇所代表的其他家族。这一发现不同于前一个小组的结果，该小组显示miR-17在ATC13中是致癌的；该小组使用了不同的ARO细胞系，SW579细胞可能受不同的基因调控网络控制。然而，他们也没有使用稳定表达PMIS-miR-17抑制剂的细胞，这种抑制剂允许解剖miR功能。

类似地，作者还证明了抑制MDA-T32细胞中miR-17会导致细胞增殖增加。有趣的是，这些细胞表达高水平的内源性miR-17，我们发现miR-17针对CCND2，抑制细胞增殖。质粒DNA在SW579细胞中过表达miR-17对CCND2转录水平有显著影响，但影响不大。此外，在内源性miR-17高表达的背景下，miR-17的过度表达对细胞形态和增殖影响不大。然而，作者发现在ATC细胞中miR-17的上调并不与致癌功能的增强相关。(生物谷 Bioon.com)

参考文献

Yan Sweat et al. miR-17acts as a tumor suppressor by negatively regulating the miR-17-92 cluster. Mol Ther Nucleic Acids. 2021 Oct 21; 26: 1148-1158. doi: 10.1016/j.omtn.2021.10.021.