从研发到申报，金斯瑞为基于CRISPR技术的细胞治疗提供新方案
来源：生物谷 2020-08-03 10:34
嵌合抗原受体T细胞疗法（CAR-T疗法）作为细胞治疗中的临床疗效耀眼的佼佼者，通过对T细胞进行基因工程修饰，从而特异性识别并高效杀伤肿瘤细胞。1989年，第一代CAR-T仅在T细胞表达单链抗体，靶向肿瘤细胞表面抗原分子，但存续时间短，限制了其发挥功效。第二、三代，将共刺激信号分子组装进CAR，提升T细胞活化和存续。第四代CAR-T共表达细胞因子，实现了在肿瘤
嵌合抗原受体T细胞疗法（CAR-T疗法）作为细胞治疗中的临床疗效耀眼的佼佼者，通过对T细胞进行基因工程修饰，从而特异性识别并高效杀伤肿瘤细胞。
1989年，第一代CAR-T仅在T细胞表达单链抗体，靶向肿瘤细胞表面抗原分子，但存续时间短，限制了其发挥功效。第二、三代，将共刺激信号分子组装进CAR，提升T细胞活化和存续。第四代CAR-T共表达细胞因子，实现了在肿瘤杀伤功能与微环境调节的升级。至今，第五代通用型CAR-T通过敲除异体T细胞的可能造成免疫排斥的基因，为CAR-T疗法的大规模生产和即时应用提供了可能。
CAR-T发展过程中，科学家利用基因工程的魔法，不断优化改造T细胞，增加其实效性、持续性、安全性、通用性等。以简单快捷的CRISPR为代表的基因编辑技术的崛起，也提供了改造T细胞的新思路，在CAR-T疗法中逐渐展露锋芒，关于CRISPR运用于细胞治疗取得的临床进展也是捷报频传。
2020年2月，宾夕法尼亚大学在《Science》发表了CRISPR编辑T细胞治疗肿瘤I期临床报告，通过CRISPR敲除内源性T细胞受体链的基因TRAC、TRBC和PD-1这3个基因，避免前两者与后续基因工程插入的受体产生错误配对或竞争，避免后者阻止T细胞执行工作。结果表明：该治疗方案耐受好，无严重不良副作用，编辑细胞在体内持续存在长达9个月，血液中分离的编辑细胞仍可杀死肿瘤。
2020年4月，四川大学华西医院利用CRISPR技术敲除T细胞上的PD-1基因，I期临床结果在《Nature Medicine》发表，输注后在外周血中可检测到编辑过的T细胞，12例均无三级以上副作用，3例达到8周稳定的疗效，中位无进展生存期为7.7周，中位总生存期为42.6周，通过二代测序，在18个候选位点中，脱靶事件的中位突变频率仅为0.05％，印证了基因编辑在抗肿瘤应用中的安全性、可行性及初步有效性。
目前，CRISPR应用于CAR-T疗法的安全和有效已经在中国和美国得到双重验证。在这个光明前景下，基于这个思路开发CAR-T产品的工作仍需要大量循序渐进的前期铺垫。从靶点选择、编辑方案筛选、编辑效果验证，到有效性/安全性评估、工艺开发等，不同阶段对试剂原料都有着不同的要求。
基于CRISPR的细胞治疗研发流程中，sgRNA作为与Cas9蛋白协同、起到精准编辑目的基因的元件，是至关重要的试剂原料。金斯瑞业界领先的、长达140nt的RNA化学合成能力，可替代传统质粒转录sgRNA、IVT sgRNA，为T细胞编辑提供编辑效率高、毒性低、批次间稳定的选择。许多细胞治疗公司的诉求是：研发阶段周期快、成本低，申报阶段标准严、质量优，这也正是金斯瑞期待为之提供支持的着力点，为细胞治疗产品开发的不同阶段提供与应用需求匹配的、更经济高效的不同解决方案。
研发初期阶段，金斯瑞可以提供交付快、成本经济、即买即用的EasyEdit sgRNA，帮助客户快速高效的筛选到对目的基因编辑效果最佳的sgRNA序列，降低研发时间、经费和人力成本。
研发验证阶段，金斯瑞可以提供HPLC纯化级别的SafeEdit sgRNA，纯度大于90%、分子量偏差小于0.05%、毒性低，用于开展候选sgRNA的细胞模型上的功能测定，动物模型上的有效性和安全性评估。
临床申报阶段，金斯瑞可以提供申报级sgRNA，纯度大于95%、分子量偏差小于0.05%、毒性低，用于IND申报。从合成、纯化到质检、分装，严格执行符合申报的质量体系，精准匹配客户需求，可提供无菌/内毒素/支原体/RNase检测、稳定性试验等。检测报告、批次记录等文件完整、合规、可追溯，已承接多家细胞治疗产品申报级sgRNA的制备。
截止2020年5月，共有41个CAR-T药物的IND申报获得CDE受理。2020年，国家药品监督管理局（NMPA）已受理复星凯特和药明巨诺的CAR-T细胞治疗产品新药上市申请。2017年12月NMPA发布了《细胞治疗产品研究与评价技术指导原则(试行)》、2020年7月CDE发布《免疫细胞治疗产品临床试验技术指导原则（征求意见稿）》，日趋规范明朗的政策将加速CAR-T企业研发申报的进程。
国内细胞治疗市场和投融资持续增长，相信在技术发展和临床进展的推动下，在高效实验和生产方案的助力下，基因编辑应用于细胞治疗将迎来更蓬勃快速的发展前景。
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