克罗恩病治疗新希望！Clin Transl Med：脂肪干细胞胞外囊泡助力改善淋巴功能、抑制炎症

克罗恩病（Crohn’s disease，CD）是一种慢性、复发性的胃肠道疾病，其炎症会累及整个肠壁及周围结构，如肠系膜。肠系膜脂肪包裹增厚（creeping fat，CrF）是CD的一个典型特征，但一直以来，人们对CrF在疾病发展过程中的作用存在争议。尽管如此，越来越多的研究表明，CrF可能在CD的进展中发挥着保护作用。脂肪组织中的脂肪干细胞（adipose tissue-derived stem cells，ADSCs）是一类具有重要调节功能的细胞，它们能够通过释放细胞外囊泡与周围细胞进行通讯，从而调节炎症反应。然而，来源于CrF中的ADSCs所分泌的EVs（CrF-EVs）在CD中的具体调节作用仍然有待深入探索。

最近，一项发表于Clin Transl Med的研究Extracellular vesicles derived from creeping fat stem cells promote lymphatic function and restrain inflammation of Crohn's disease发现，来源于CrF脂肪组织干细胞的细胞外囊泡（extracellular vesicles，EVs）在改善CD淋巴功能及抑制炎症方面具有巨大潜力，为CD治疗带来了新的方向。

CrF-EVs在小鼠体内的分布与定位

研究人员从CD患者的CrF和正常MAT中成功分离并培养ADSCs，通过流式细胞术检测到其表达CD90、CD44、CD29等间充质阳性标志物，不表达CD45阴性标志物，同时油红O染色证实了其脂肪分化潜能。对ADSCs分泌的EVs进行表征分析，透射电子显微镜显示CrF-EVs和Ctrl-EVs具有典型形态，Westernblot检测到EV标志物的表达，纳米颗粒跟踪分析表明其大小在100-200 nm之间。将DiR荧光标记的EVs尾静脉注射到Il-10^-/-小鼠体内，12小时后荧光显微镜观察发现，CrF-EVs和Ctrl-EVs均能有效定位于小鼠结肠和肠系膜，这为后续研究其功能奠定了基础。

CrF-EVs对小鼠结肠炎和肠系膜炎症的缓解作用

Il-10^-/-小鼠从15周龄开始出现明显的结肠和肠系膜炎症，19周时体重减轻、结肠缩短，内镜下可见结肠壁增厚、血管模式改变，内镜和组织学评分升高。CrF-EVs治疗4周后，可显著改善这些症状，使小鼠体重减轻趋势减缓、结肠长度恢复、炎症评分降低。同时，CrF-EVs还能逆转Il-10^-/-小鼠肠系膜肥大的现象，使肠系膜重量与体重比值恢复正常，且治疗后的肠系膜脂肪细胞变小，呈现出脂肪“褐变”的特征，这一过程被认为具有抗炎作用。此外，CrF-EVs可减少结肠和肠系膜中CD4⁺ T细胞和F4/80⁺巨噬细胞的浸润，降低血清和组织中TNF-α、IL-1β、IL-6等促炎因子水平，表明CrF-EVs能有效抑制炎症反应。

图1. CrF-EVs可减轻Il-10^-/-小鼠的自发性结肠炎和肠系膜炎症

CrF-EVs对淋巴引流和淋巴内皮细胞功能的增强作用

鉴于Il-10^-/-小鼠存在淋巴管功能障碍，研究人员假设改善肠系膜淋巴功能可缓解炎症。通过实验发现，CrF-EVs治疗后，小鼠结肠和肠系膜的淋巴管密度显著增加，表明其促进了淋巴管生成。在淋巴引流功能检测中，口服Bodipy FL-C16荧光脂质示踪剂后，CrF-EV治疗组小鼠肠系膜淋巴引流明显增强；直肠黏膜下注射Evansblue染料后，该组小鼠远端直肠染料残留减少，进一步证实CrF-EVs可促进淋巴引流。体外实验表明，HLECs能摄取CrF-EVs，摄取后其增殖、迁移和管形成能力显著增强，同时CCL21分泌增加，而皮下脂肪组织来源的ADSCs分泌的EVs（SAT-EVs）对淋巴功能无明显影响，突出了CrF-EVs对淋巴内皮细胞功能的特异性调节作用。

CrF-EVs通过miR-132-3p发挥作用的机制

为探究CrF-EVs调节淋巴功能的分子机制，研究人员进行了miRNA高通量测序，发现CrF-EVs中有多个miRNAs表达发生改变，其中miR-132-3p在CrF-EVs中的表达显著高于Ctrl-EVs，且在CrF-ADSCs和HLECs中也高表达。抑制CrF-EVs中的miR-132-3p可削弱其对HLECs增殖、迁移、管形成和CCL21分泌的促进作用，而过表达miR-132-3p则能增强HLECs的这些功能，证实CrF-EVs通过传递miR-132-3p调节淋巴内皮细胞功能。

图2. CrF-EVs通过递送miR-132-3p改善淋巴管内皮细胞功能

CrF-EV-miR-132-3p对体内淋巴管生成和炎症的影响

生物信息学分析预测miR-132-3p可能通过靶向RASA1激活ERK1/2信号通路发挥作用。在Il-10^-/-小鼠中，CrF-EVs可抑制肠系膜和结肠淋巴管中Rasa1的表达，促进淋巴管生成和淋巴引流；抑制miR-132-3p则可逆转这些作用，导致淋巴管密度和淋巴引流功能恢复到未治疗水平，同时炎症症状也再次加重，表明CrF-EV-miR-132-3p在体内通过调节淋巴管功能抑制炎症。

临床样本中miR-132-3p与CD的相关性

对CD患者的临床样本分析发现，疾病肠道和相应肠系膜（CrF）中miR-132-3p水平显著高于边缘组织和对照组，且与淋巴管密度呈正相关。同时，CrF中miR-132-3p与脂肪因子脂联素（ADP）和淋巴管生成因子VEGF-C呈正相关，与炎症因子TNF-α和IL-6呈负相关，提示miR-132-3p在CrF中的升高可能具有刺激淋巴管生成和抗炎作用。此外，血清miR-132-3p水平在活动期CD患者中显著高于缓解期患者和健康对照，且与CDAI呈正相关，表明血清miR-132-3p可作为监测CD疾病活动度的潜在生物标志物。

图3. miR-132-3p的高表达与CD患者的淋巴管密度（LVD）和炎症密切相关

总体而言，本研究表明，CrF-EVs通过传递miR-132-3p，靶向RASA1/ERK1/2轴，有效改善了CD小鼠模型的淋巴功能，减轻了结肠炎和肠系膜炎症。临床样本分析进一步证实了miR-132-3p在CD患者中的表达变化及其与疾病活动的紧密联系。尽管研究存在一定局限性，如CrF微环境复杂导致难以明确ADSCs及其EVs变化的具体原因，以及miR-132-3p调节淋巴管生成的下游靶点尚未完全阐明，但这些发现为深入理解CD发病机制提供了新视角，也为开发基于EVs和miRNA的治疗策略提供了理论依据。未来，可进一步探索生物工程技术在靶向递送miR-132-3p治疗CD方面的应用，有望为CD患者带来新的治疗希望。（生物谷Bioon.com）

参考文献：

Shu W, Wang Y, Chen M, et al. Extracellular vesicles derived from creeping fat stem cells promote lymphatic function and restrain inflammation of Crohn's disease. Clin Transl Med. 2024;14(12):e70086. doi:10.1002/ctm2.70086