Nat Med:接受基因治疗2-4年后A型血友病患者mRNA和蛋白表达会发生什么改变呢？

A型血友病是一种X连锁出血性疾病，由第八因子（FVIII）凝血蛋白活性不足引起。A型血友病患者容易发生自发和创伤引起的软组织和关节出血，导致疼痛、致残的关节病，生活质量受损。迄今已有研究表明单次静脉注射valoctocogene roxaparvovec（AAV5-hFVIII-SQ）进行因子VIII基因转移，在严重血友病A患者中显示出持续5年的临床效益。

在本研究中，研究人员使用了来自参加valoctocogene roxaparvovec基因转移临床试验的严重A型血友病患者的肝脏活检样本，以描述载体基因组分布、外显体形式和基因转移后持续多年的载体DNA表达。这些发现提供了对使用AAV基因治疗平台成功进行人体肝脏体内转导背后的复杂分子机制的深入了解。

组织病理学显示，表达hFVIII-SQ蛋白的肝细胞没有发育不良、结构扭曲、纤维化或慢性炎症，也没有检测到内质网压力。肝细胞对载体基因组染色呈阳性，显示出剂量越大，转导的细胞越多的趋势。分子分析表明存在全长的、倒置末端重复融合的、圆形的外显体基因组，这与长期表达有关。尽管成功转导的情况相似，但注意到转基因表达的个体间差异，这可能是受载体转录、hFVIII-SQ蛋白翻译和分泌的宿主介导的转导后机制的影响。总的来说，这些结果证明了AAV5-hFVIII-SQ给药后持续的外显体载体结构，并揭示了介导个体间差异的潜在机制。总之，这些数据表明，AAV5-hFVIII-SQ转导后，FVIII的长期表达与肝脏中圆形外显体的形成有关。然而，整合的全长基因组也有可能介导FVIII的长期表达。

                                                  用H&E或苏木精和Van Gieson染色的代表性肝脏组织病理学切片

                                                     5名参与者的肝活检样本的组织病理学和hFVIII-SQ DNA转导效率

在这项研究中，单次输注valoctocogene roxaparvovec（AAV5-hFVIII-SQ）后，hFVIII的长期表达与循环全长基因的存在有关，在含有载体基因的肝细胞数量、循环全长/ITR融合的载体基因的数量和肝脏中hFVIII-SQ基因的表达方面有可观察的剂量依赖趋势。有效载体基因组转导后转基因表达的个体间差异可能是由于参与转录和蛋白质折叠/分泌的调控分子表达的差异，对这些复杂机制的进一步调查是有必要的。

原始出处：Fong S, Yates B, et al.Interindividual variability in transgene mRNA and protein production following adeno-associated virus gene therapy for hemophilia A. Nat Med. 2022 Apr;28(4):789-797. doi: 10.1038/s41591-022-01751-0. Epub 2022 Apr 11. PMID: 35411075.