青光眼“狙击战”新武器！Neural Regen Res：R-28细胞外囊泡精准投喂，拯救视网膜神经节细胞

青光眼，作为一种常见的眼科疾病，正悄然威胁着全球众多患者的视力健康。它以慢性进行性视神经损伤和视网膜神经节细胞死亡为主要特征，目前在临床上仍然缺乏有效的治疗手段。然而，医学研究从未停止探索的脚步，一项发表于Neural Regen Res的最新成果R-28 cell-derived extracellular vesicles protect retinal ganglion cells in glaucoma或许为青光眼的治疗带来了新的曙光。

细胞外囊泡（EV）是细胞间通信的重要“信使”，这些50-150纳米大小的脂质结合载体，在再生医学领域展现出巨大的潜力。它们能将内源性物质输送到靶细胞，促进组织修复，在多种退行性疾病的治疗研究中备受关注，在视网膜疾病的神经保护方面也初露锋芒。此前研究发现，多种干细胞来源的细胞外囊泡，如骨髓间充质干细胞、人脐带华通氏胶间充质干细胞、尿液来源的细胞外囊泡等，都对视网膜神经节细胞有一定的保护作用。不过，细胞外囊泡的治疗效果因来源不同而存在差异，从原代细胞中分离细胞外囊泡也面临诸多挑战，比如细胞传代和患者个体差异会导致产品不一致。因此，寻找一种稳定、标准化的细胞外囊泡来源至关重要。

此次研究聚焦于R-28细胞系，这是一种源自出生后6天大鼠视网膜培养的永生细胞系。研究人员推测，R-28细胞分泌的细胞外囊泡可能携带神经保护蛋白，对受损的视网膜神经节细胞起到保护作用。于是，他们开展了一系列实验，旨在验证这一假设。

在实验中，研究人员首先成功从R-28细胞系中分离出细胞外囊泡，并对其进行了全面的表征和量化分析。结果显示，这些细胞外囊泡呈现出经典的细长纺锤形，粒径相对均一，平均粒径为200.8±1.1 nm，且富含细胞外囊泡的标志性蛋白CD81，表明成功获取了具有典型特征的R-28细胞外囊泡。

图 1：通过纳米颗粒分析和用细胞外囊泡特异性标记物进行免疫印迹确定细胞外囊泡制备物中颗粒的直径和浓度

接着，研究人员分别在体外和体内对R-28细胞外囊泡的神经保护作用进行了测试。体外实验结果令人振奋：在原代视网膜细胞培养中，R-28细胞外囊泡处理组的视网膜神经节细胞存活率显著提高，比未处理的对照组多出35.08%；在促进神经突生长方面，R-28细胞外囊泡的效果与阳性对照睫状神经营养因子（CNTF）相似，处理组神经突长度也比对照组更长，虽然未达到统计学显著性，但已接近显著水平。在人胚胎干细胞分化的视网膜神经节细胞实验中，R-28细胞外囊泡同样表现出神经保护作用，且趋势上比CNTF更具优势，存活的视网膜神经节细胞数量更多。

图 2：R-28来源的细胞外囊泡对视网膜神经节细胞存活和再生的体外测试

体内实验在大鼠青光眼模型中展开。通过向大鼠前房注射微珠诱导眼压升高，模拟青光眼发病过程。实验结果表明，微珠注射导致眼压显著升高并持续至实验结束，同时视网膜神经节细胞数量明显减少。而每周玻璃体内注射R-28细胞外囊泡，能在一定程度上保护视网膜神经节细胞，使细胞数量有所增加，展现出神经保护的趋势。不过，令人遗憾的是，R-28细胞外囊泡未能有效保护视网膜神经节细胞的轴突，在视神经损伤评分中，与青光眼模型组相比无明显差异。

图 3：R-28来源的细胞外囊泡在慢性青光眼模型中对视网膜神经节细胞显示出保护趋势

此外，研究人员还对R-28细胞外囊泡处理后的人视网膜神经节细胞进行了miRNA分析。结果发现，多个miRNA的表达发生了显著变化，如hsa-miRNA-4443、hsa-let-7e-5p和hsa-miRNA-331-3p表达上调，hsa-miRNA-216b-5p、hsa-miRNA-421和hsa-miRNA-374b-5p表达下调 。通过预测这些miRNA可能调节的基因和信号通路，发现它们与免疫细胞激活、血小板衍生生长因子信号通路、Wnt信号通路以及细胞凋亡信号通路等密切相关，这为揭示R-28细胞外囊泡的神经保护机制提供了重要线索。

综上所述，这项研究首次证实了R-28细胞分泌的细胞外囊泡在体外和体内对视网膜神经节细胞均具有神经保护作用，且这种作用可能是通过miRNA介导的。尽管目前R-28细胞外囊泡在保护视神经轴突方面还存在不足，但它为青光眼的治疗提供了新的方向和潜在的治疗策略。未来，随着研究的不断深入，有望进一步优化治疗方案，为青光眼患者带来真正有效的治疗方法，让更多患者重获清晰视界。（生物谷Bioon.com）

参考文献：

Durmaz E, Esmaelli M, Lewis P, Cimaglia G, Clayton A, Mead B. R-28 cell-derived extracellular vesicles protect retinal ganglion cells in glaucoma. Neural Regen Res. Published online March 25, 2025. doi:10.4103/NRR.NRR-D-24-00709