蛋白核心岩藻糖基化与O-GlcNAc位点解析方面获进展

蛋白糖基化是蛋白翻译后修饰之中最为复杂的一类修饰，在药物研发和新的药物靶点发现中颇具应用前景。然而，与生物系统中蛋白质糖基化的多样性相比，聚糖分析的工具仍然有限，直接限制了蛋白糖基化在药物研发中的应用。中国科学院上海药物研究所文留青课题组前期发展了基于生物素探针分子和糖苷内切酶的可逆标记策略，实现了对核心岩藻糖的可逆标记研究，在组学水平上解析了蛋白核心岩藻糖糖基化在细胞表面的分布。然而，该团队在利用先前报道的方法对更复杂的生物学样本进行分析时发现，由恶唑环化的生物素探针分子引起的非特异标记反应。

上海药物所文留青课题组与周虎课题组发展了基于温敏材料（PNIPAM）探针分子的新一代标记方法。实现了在多肽水平上对细胞内两种重要的蛋白糖基化（核心岩藻糖基化和O-GlcNAc糖基化）的同步精准解析（又名“一石二鸟策略”）。相关以Two Birds One Stone” Strategy for the Site-Specific Analysis of Core Fucosylation and O-GlcNAcylation为题，作为当期封面，在线发表在《美国化学会志》（JACS）上。

科研人员利用新建立的富集策略，研究三种肿瘤细胞系的糖蛋白组学，获得了比多数报道方法更多的蛋白糖基化位点数。组学结果显示，核心岩藻糖基化主要与细胞表面和细胞外基质的功能相关，而O-GlcNAc糖基化主要与细胞核和DNA转录过程相关。保守的糖基化位点分析发现，核心岩藻糖蛋白主要与PI3K-Akt信号通路相关，而O-GlcNAc糖蛋白主要与Notch通路相关。这与此前报道的研究结果吻合，进一步佐证了该方法的可靠性。该方法是在多肽水平对目标样本进行标记和富集，因而具有更广阔的应用场景，例如，可实现对肿瘤组织样本的分析。

上述成果为活细胞中复杂糖基化修饰的解析提供了经济、便捷和有效的研究工具，有助于推动糖基化的化学酶法标记策略在蛋白糖基化的功能研究和潜在药物新靶点的发现等方面的应用。研究工作得到临港实验室、上海市和国家自然科学基金委员会的支持。

“一石二鸟”策略解析核心岩藻糖基化和O-GlcNAc糖基化位点