这样做，会大大减少IHC背景信号
来源：生物谷 2020-06-03 08:13
当对小鼠样本进行 IHC 实验时，CST 更推荐您使用兔单克隆抗体而不是鼠单克隆抗体，为什么，这么做有什么好处？3 步让您了解原因！使用小鼠单克隆抗体会造成小鼠组织结果无法解读如经适当验证，小鼠单克隆抗体会特异性地对目的靶标染色，但数据解读很可能因使用抗小鼠 IgG 检测试剂（二抗）同时能检测内源性小鼠 IgG 而受到影响。如图1，依次使用一种 α-平滑肌肌
当对小鼠样本进行 IHC 实验时，CST 更推荐您使用兔单克隆抗体而不是鼠单克隆抗体，为什么，这么做有什么好处？3 步让您了解原因！
使用小鼠单克隆抗体会造成小鼠组织结果无法解读
如经适当验证，小鼠单克隆抗体会特异性地对目的靶标染色，但数据解读很可能因使用抗小鼠 IgG 检测试剂（二抗）同时能检测内源性小鼠 IgG 而受到影响。如图1，依次使用一种 α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）小鼠单克隆抗体和一种抗小鼠 IgG 检测试剂对石蜡包埋的小鼠肺细胞进行免疫组织化学 (IHC) 分析，结果显示出预期的特异性染色，但由于存在抗小鼠 IgG 二抗，还显示出背景染色过度。避免小鼠 IgG 背景的唯一办法是在你的实验步骤中添加费力的步骤，或换用一种非啮齿类抗体，例如联合使用兔单克隆抗体和抗兔 IgG 的二抗。
图1 ，注：小鼠 IgG 二抗导致背景染色过度。
抗小鼠 IgG 二抗会造成小鼠抗小鼠背景染色
使用小鼠一抗需要抗小鼠 IgG 二抗或检测试剂，这同时会对一抗和小鼠组织样品的 IgG 蛋白进行染色。为了让您直观地观察，图2展示的是在没有一抗的情况下，使用 SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP， Mouse) #8125 对石蜡包埋的小鼠肺细胞进行 IHC 分析。
图2 ，注：小鼠 IgG 二抗导致背景染色过度。
兔单克隆抗体无需额外的实验步骤即可产生可解读的小鼠组织结果
使用在小鼠组织中经 IHC 验证的兔单克隆一抗可克服小鼠抗小鼠染色，并发现明确且可解读的结果。图3 所示的是使用 α-Smooth Muscle Actin (D4K9N) XP® Rabbit mAb #19245 对石蜡包埋的小鼠肺细胞进行的 IHC 分析。
图3，注：使用兔单克隆抗体和抗兔IgG检测即可避免背景过度染色。
若您正在使用来自CST的可用于IHC实验的兔单克隆抗体进行实验，不用担心背景染色过度的问题。
在小鼠组织中进行过 IHC 验证的部分兔单克隆抗体（点击查看）
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