给细胞外囊泡装个“导航”！J Control Release：融合蛋白助力细胞外囊泡靶向B细胞，大幅提升抗原特异性T细胞扩增

在肿瘤治疗领域，癌症免疫疗法近年来取得了显著进展，尤其是免疫检查点抑制剂，为众多癌症患者带来了新希望。然而，这类疗法并非对所有患者都有效，还可能引发严重的副作用，如自身免疫疾病。因此，科研人员一直在不断探索新的免疫治疗策略，以拓宽癌症治疗的选择范围。其中，利用肿瘤抗原负载的细胞外囊泡（EVs）进行治疗性疫苗接种，成为了一个极具前景的研究方向。

近期，发表于J Control Release的一项研究A fusion protein that targets antigen-loaded extracellular vesicles to B cells enhances antigen-specific T cell expansion为这一领域带来了重要突破。

细胞外囊泡是由所有细胞分泌的膜包裹颗粒，其表面和内部包含蛋白质、脂质、代谢物和核酸等物质，这些成分来源于产生它们的细胞。树突状细胞来源的EVs（DC EVs）含有对DC功能至关重要的分子，在小鼠实验中，抗原负载的DC EVs能够有效诱导抗肿瘤细胞毒性T细胞活性，显著抑制肿瘤生长。不过，DC EVs在临床试验中的表现却不尽如人意，虽然安全性良好，但疗效有限，未能超越二期试验阶段。

越来越多的证据表明，B细胞在抗肿瘤的CD4和CD8⁺ T细胞反应中发挥着重要作用。比如，在缺乏B细胞或主要缺乏边缘区B细胞的小鼠中，针对EVs的抗原特异性CD8⁺ T细胞扩增和IFN-γ分泌明显减少。这不禁让人思考：能否通过将EVs特异性靶向B细胞，来增强抗肿瘤T细胞反应呢？

基于此，研究人员展开了深入探究。他们构建了一种可溶性融合蛋白，包含lactadherin的磷脂酰丝氨酸结合域（C1C2）和GP350的hCD21结合域（D123），旨在利用该融合蛋白修饰并将EVs靶向B细胞。

研究结果令人振奋。首先，融合蛋白修饰后的EVs在大小和形态上并未发生明显改变，确保了其基本特性的稳定。在体外实验中，D123修饰的EVs与未修饰或用非靶向对照蛋白修饰的EVs相比，对B细胞的靶向能力提高了5倍。在人外周血单个核细胞（PBMCs）和hCD21转基因（hCD21Tg）小鼠脾细胞实验中，均观察到了这一显著效果。而且，D123修饰的EVs与B细胞结合时，不会诱导B细胞摄取EVs，也不会导致B细胞激活。

图 1：从骨髓来源的树突状细胞（BMDC）培养物中分离的囊泡含有细胞外囊泡（EV）标记物，用D123融合蛋白修饰不影响其形态

体内实验进一步验证了D123修饰的EVs的靶向能力。将修饰后的EVs注射到hCD21Tg小鼠体内后发现，它们能够特异性地靶向脾脏、血液和淋巴结中的B细胞，且不会受到红细胞和血小板的影响。同时，研究人员还发现，CD21靶向对EVs在各器官的分布没有明显影响，这意味着修饰后的EVs在体内的整体分布格局保持稳定。

图 2：用CD21结合蛋白D123修饰EVs可增加其在体外与B细胞的结合

最为关键的是，免疫实验结果显示，与未靶向的EVs相比，用hCD21靶向、卵清蛋白（OVA）负载的EVs免疫小鼠，可使抗原特异性CD8⁺ T细胞的比例显著提高。尽管在抗原特异性B细胞反应方面，各EVs组之间没有显著差异，但这一发现依然表明，CD21靶向的BMDC EVs能够有效增加抗原特异性CD8⁺ T细胞的数量。

图 3：与未靶向的EVs相比，靶向CD21的EVs诱导更多的OVA特异性CD8⁺T细胞

综上所述，这项研究成功证明了用PS结合融合蛋白修饰EVs，能够使其靶向B细胞表面的hCD21，为难以对起源细胞进行EV工程改造的系统提供了一种可行的靶向方法。而且，用hCD21靶向的抗原负载EVs免疫小鼠，可促进抗原特异性CD8⁺ T细胞的扩增，展现出在肿瘤免疫治疗领域的巨大潜力。期待未来能有更多基于此的研究，进一步挖掘其治疗价值，为癌症患者带来更多的治疗选择和生存希望。（生物谷Bioon.com）

参考文献：

Offens A, Teeuwen L, Gucluler-Akpinar G, et al. A fusion protein that targets antigen-loaded extracellular vesicles to B cells enhances antigen-specific T cell expansion. J Control Release. Published online March 25, 2025. doi:10.1016/j.jconrel.2025.113665