CELL RESEARCH：内源性伊它康酸限制了 CD8+ T 细胞的活化，并增强了对 Pc 感染的易感性

古细菌 Methanoperedens spp.含有一个被称为 "Borgs "的约 1Mb的染色体外环状DNA，具有扩大代谢能力和提高甲烷氧化能力的潜力。在生物工程中，将多个物种的异质遗传物质引入单个生物体以重建生物过程是一种标准做法。在大规模 DNA 组装方面，酵母菌因其高效的同源重组能力而成为首选，其中已开发出了两种主要策略以实现兆级规模的 DNA 组装，但组装过程非常复杂， 虽然也有其他迭代组装方法的报道，但这些方法往往需要复杂的过程，目前的方法效率不高。因此大规模 DNA 组装和输送的挑战是如何高效地将完整的大规模 DNA 导入细胞，既在宿主细胞中组装，又输送到受体细胞中。

近段时间，来自天津大学合成生物学前沿研究院Yuan Ma教授及团队在酵母程序化单倍体的基础上开发了一种绕过减数分裂自然过程的 CRISPR/Cas9 介导的单倍体化方法，命名为 HAnDy，旨在高效组装和传递大 DNA，促进大规模 DNA 的组装和传递，从而扩展和破译复杂的生物功能。

结果显示，通过 CRISPR/Cas9 在 S. cerevisiae 的所有染色体中心粒上诱导 DSB，可以有效地消除二倍体酵母的一组基因组。这种通过消除基因组实现单倍体化的方法赋予了酵母绕过减数分裂过程进行持续交配的能力。对在百万碱基 synAC 的组装过程中，菌落数和组装精度都相对稳定，表明这种方法可能与大小无关。组装过程只需依靠两个酵母之间的自发交配和程序单倍体化就能完成 Mb 大小的组装，而不需要任何复杂耗时的操作。

通过程序单倍体化传递百万碱基合成AC的结果表明，在交配过程中刺激单倍体化系统可将巨碱基 DNA 选择性地传递给不同的未修饰受体菌株。通过对菌株进行 RNA 测序（RNA-seq）分析，结果显示ynAC 赋予了拟南芥 CBS432 在 40 ℃ 下的耐热性，并赋予了 BY4741 和 CBS432 利用戊二酸的能力，揭示了 synAC 的功能增益效应.

绕过减数分裂的 CRISPR/Cas9 介导的单倍体化

总之，通过设计、组装和传递 synAC，将数百个基因组合导入单一酵母的策略，为宿主特性的多样化和复杂性状的系统挖掘提供了一种非同寻常的方法。此外，它还为研究大量蛋白质的过度表达对细胞内资源分配的影响提供了一个模型。

参考文献：

Ma Y, Su S,et. Convenient synthesis and delivery of a megabase-scale designer accessory chromosome empower biosynthetic capacity. Cell Res. 2024 Feb 8. doi: 10.1038/s41422-024-00934-3. Epub ahead of print. PMID: 38332200.