韩春雨新论文：开发新型PCR技术，实现快速、高精度DNA检测，且无需精密仪器

2016 年 5 月 2 日，河北科技大学韩春雨作为通讯作者（高峰为第一作者）在国际著名学术期刊 Nature Biotechnology 上发表了题为：DNA-guided genome editing using the Natronobacterium gregoryi Argonaute 的研究论文，使用来自嗜盐古菌的  Argonaute 蛋白（NgAgo）进行 DNA 引导的基因组编辑。

该研究称，NgAgo 对真核生物（包括人）具有基因编辑能力。该研究成果很快在世界范围内爆火，韩春雨几乎一夜之间火遍学术界，被赞誉为“在三流学校取得世界一流原创成果，打破国际基因编辑技术垄断”。

但世界各地的实验室均为能重复该研究成果，引发广泛质疑。2017 年 8 月 3 日，韩春雨撤回了该论文。河北科技大学的调查结论称，未发现韩春雨团队有主观造假情况。

此后，韩春雨沉寂多年，直到 2022 年 1 月，韩春雨作为通讯作者，高峰作为第一作者，在 Nucleic Acids Research 期刊发表了一篇题为：A Cas6-based RNA tracking platform functioning in a fluorescence-activation mode 的最新研究论文。

该研究开发了一种新的基于 Cas6 的 RNA 荧光追踪平台——Cas6FC，其具有更高的灵敏度和特异性，可在活细胞中几乎没有背景噪声的检测目标 RNA。

近日，韩春雨、高峰在预印本平台 bioRxiv 发表了题为：Introducing An Argonaute-facilitated Isothermal Amplification Technology 的论文。该论文的署名单位为杭州微编生物科技有限公司。

该论文介绍了一种等温 Ago-PCR 技术，该技术实现了 65°C 恒温条件下的核酸模板扩增，其核心创新在于以 Argonaute 介导的靶向结合替代传统引物退火步骤。这使得等温 Ago-PCR 不仅摆脱了对复杂引物设计与精密温控设备的依赖，更实现了扩增效率与保真度的双重提升。该平台可在 30 分钟内检测低至 3 拷贝/反应的靶标，灵敏度与定量 PCR（qPCR）相媲美且扩增动力学更优，同时兼容常规温控装置，这些特性使其具备替代 qPCR 的广泛应用潜力。

研究团队从嗜热菌属中筛选出一种 Argonaute 蛋白——CalAgo。这种蛋白如同“分子剪刀”，能精准切割特定 DNA 序列。通过对其关键结构域进行改造（D552A/D622A双突变），获得丧失切割能力但保留结合能力的 dmCalAgo。这种改造版蛋白在 65℃ 时仍保持稳定，成为技术的基石。

技术突破关键在于三种酶的协同作用：

1、解旋酶（Tte UvrD）：在 65℃ 时解开 DNA 双链；

2、改造蛋白（dmCalAgo）：携带向导 DNA 精准锚定目标序列；

3、聚合酶（Bst）：以暴露的 DNA 为模板进行复制。

这种设计用蛋白介导的靶向结合替代了传统 PCR 的温度循环，首次实现全程 65℃ 恒温扩增。与传统 qPCR 对比，这一新技术展现出显著优势：

灵敏度：检出限低至 3 拷贝/反应；

速度快：30 分钟内完成检测（比qPCR快1倍）；

普适性：可扩增环状、线状、质粒等各类 DNA 模板；

稳定性：在55-75℃宽温度范围内保持活性。

实验结果证明，仅需普通恒温装置（例如水浴锅、保温杯）即可完成高精度检测，彻底摆脱对昂贵 PCR 仪的依赖。这使野外检测、基层医疗、家庭自测等场景实现实验室级精度成为可能。

韩春雨团队已对该技术申请专利（专利号：CN116479095A），有望重塑病原体检测、基因分型、现场快检等领域。