《癌细胞》：南开大学团队揭示乳腺癌细胞“化用”共刺激分子CD28，上调PD-L1表达实现免疫逃逸的机制！

南开大学免疫学研究所曹雪涛院士团队在Cancer Cell期刊发表的研究成果[1]就显示：T细胞表面常见的经典免疫共刺激分子CD28，竟然会被三阴性乳腺癌（TNBC）细胞“化用”，即癌细胞表达的CD28胞内结构域能与PD-L1编码基因Cd274 mRNA结合，从而上调PD-L1表达水平，促进免疫逃逸并导致免疫耐药，这也实在是太狡猾了吧？

一图总结论文核心内容

关注免疫治疗的读者们肯定都不会对CD28感到陌生，经典的免疫共刺激分子之一嘛，对T细胞从生存到代谢再到功能的方方面面都有重要影响[2]。但长期以来，学界像是默认CD28的版权归T细胞所有一样，并没怎么探索CD28在其它免疫细胞乃至癌细胞中是否存在，更别说是CD28的潜在促癌功能，只能说知识盲区属实有点大了。

而在本次研究中，南开大学研究者们也是先对TNBC这种典型的免疫冷肿瘤进行体内全基因组CRISPR筛选，专门识别影响免疫逃逸或抗肿瘤应答的关键基因，Cd28才作为候选基因之一被揪了出来。由于此前从未有研究报告癌细胞中存在CD28，研究者们还专门通过RNA原位杂交、蛋白质印迹和免疫荧光等多种技术对结论进行了多次验证。

验证出来的发现可就更值得重视了，不只是癌细胞内存在CD28的问题，而且CD28主要处于TNBC细胞的胞浆与细胞核中，与在T细胞的细胞膜表面表达明显不同，这就提示CD28在癌细胞中的功能大概率也是“非经典”的；而敲除Cd28后，TNBC细胞在免疫健全小鼠中就完全无法形成肿瘤，小鼠也能长期生存，这种抑癌效应则主要是CD8⁺T细胞介导的。

很显然，CD28的存在会使TNBC细胞逃过CD8⁺T细胞主导的抗肿瘤免疫应答。研究者们还通过回补实验，即分别让TNBC细胞表达CD28蛋白的不同片段证实，CD28的胞内结构域存在与否，才是TNBC细胞能否实现免疫逃逸的关键，下一步探索也就有明确方向了。

CD28胞内结构域介导免疫逃逸

流式细胞术分析显示，敲除TNBC细胞Cd28导致的肿瘤微环境重塑，代表性特征是CD8⁺T细胞以及1型经典树突状细胞（cDC1s）的数量和占比上升，且CD8⁺T细胞的IFN-γ、颗粒酶B和穿孔素等关键功能分子表达明显上调，说明被激活进入了战斗力超强的状态，而在体内实验（使用多西环素诱导敲低Cd28）中的发现也基本相同，即敲低TNBC细胞的Cd28不仅可以有效抑癌，还能克服TNBC细胞对PD-1抑制剂治疗的耐药。

那接下来，该揭示CD28导致免疫逃逸的具体机制了：借助单细胞RNA测序，研究者们发现敲除Cd28直接导致了TNBC细胞的PD-L1表达下调；免疫共沉淀实验则显示，CD28主要会与多种RNA结合蛋白（RBPs）发生相互作用，可能借助RBPs影响PD-L1编码基因Cd274 mRNA的稳定性，但其实顺序是CD28的胞内结构域先直接结合Cd274 mRNA，然后再募集RBPs中的小核糖核蛋白多肽B2（SNRPB2）来稳定Cd274 mRNA。

CD28胞内结构域可直接结合Cd274 mRNA，并募集SNRPB2来稳定Cd274 mRNA

通过上述机制，CD28就能够帮癌细胞上调自身PD-L1表达水平、实现免疫逃逸，研究者们最后也分析了不同亚型人类乳腺癌患者的组织样本，证实癌细胞CD28表达水平与PD-L1表达上调、肿瘤内CD8⁺T细胞浸润减少和患者预后不良相关，且在TNBC中尤为突出，而肺癌样本中竟然也存在CD28表达水平和PD-L1表达的相关性。免疫共刺激分子里竟然会出这么一个“叛徒”，赶紧想办法精准干预吧，最好还能不伤及T细胞。