CD：免疫治疗耐药迎来新解，1/2期研究成果喜人

免疫检查点抑制剂（CPI）是近几年来癌症治疗领域的突破性进展，改变了许多癌症患者的预后[1, 2]，但仍有相当一部分患者对抗PD-1/PD-L1治疗抵抗[3]。

俗话说的好，“打虎亲兄弟，上阵父子兵”，若能够为CPI找一个强有力的帮手，或许能够解决这部分耐药的肿瘤。

这不，好消息来了，来自西班牙纳瓦拉大学的Ignacio Melero领衔的团队在著名期刊《癌症发现》上发表了双特异性抗体PD-L1×4-1BB（GEN1046）的临床前实验和I/IIa期临床试验（NCT03917381）初步结果[4]。

研究发现，对于晚期难治性实体肿瘤患者（很多对CPI耐药），GEN1046安全性较好，且有效率达到65.6%（40/61）。这一结果提示GEN1046可用于治疗对CPI耐药的患者，填补CPI耐药患者治疗的临床空白。

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4-1BB（CD137）是一种表达于活化的CD4+、CD8+T细胞和NK细胞表面的受体，激活后可活化CD8+T细胞，增加T细胞总数并增强其功能[5]。

虽然4-1BB强激动性单抗（Urelumab）具有一定的临床应用潜力，但由于具有显著的肝毒性，因此其临床应用受限[6]。而另一个4-1BB弱激动性单抗（Utomilumab），尽管肝毒性较小，但作为单药治疗的抗肿瘤活性很弱[7]。

GEN1046是一个基于DuoBody®技术平台，通过单克隆全人源PD-L1和人源化4-1BB抗体的Fab臂交换产生的PD-L1×4-1BB双特异性抗体。

GEN1046构建示意图

研究人员首先在体外研究了GEN1046与靶点的结合能力，发现在0.01-1μg/mL范围内同时结合PDL1和4-1BB的能力最强。

GEN1046双特异性抗体还有一特殊之处，即GEN1046的4-1BB激动特性只有在结合至PD-L1+细胞后才会产生，但在无4-1BB结合时也能阻断PD-1/PD-L1通路。这意味着GEN1046的PD-L1特异性Fab臂能作为经典CPI发挥作用，同时减少了4-1BB受体非选择性激活所带来的副作用。

GEN1046的4-1BB激动特性只有在结合至PD-L1+细胞后才会产生

相比于PD-L1单抗、4-1BB单抗（或两单抗结合）、PD-L1xctrl抗体以及ctrlx4-1BB抗体（或两抗体结合），GEN1046在体外可显著促进CD8+T细胞的增殖，并增加促炎细胞因子的分泌（如IFNγ）。

紧接着，研究人员构建了人PD-L1（hPD-L1）和4-1BB双敲入转基因C57BL/6小鼠（hPD-L1/h4-1BB dKI小鼠），并将hPD-L1转染的MC38肿瘤细胞（MC38-hPD-L1）植入小鼠，建立体内肿瘤模型。然后对小鼠给予GEN1046 5mg/kg（每周2次）治疗，共给药3周，以在体内评估GEN1046的抗肿瘤活性。

经治疗后，研究人员惊喜地发现，所有荷瘤小鼠均对治疗有反应，且相较于对照组，干预组小鼠无进展生存期（PFS）显著延长。在6只疗效达到完全缓解的小鼠中，再次接种MC38-hPD-L1肿瘤细胞不能使这些小鼠产生肿瘤，这表明经GEN1046治疗的小鼠可产生免疫记忆。

GEN1046小鼠体内实验结果

为了进一步表征小鼠体内的抗肿瘤免疫反应，研究人员对接种MC38-hPD-L1肿瘤细胞的hPD-L1/h4-1BB dKI小鼠的肿瘤和脾脏进行了免疫表型鉴定，并检测了血液内T细胞和相关细胞因子的含量。

研究结果发现，相比于PD-L1单抗治疗和对照组的小鼠，GEN1046可诱导小鼠肿瘤内和脾脏内CD3+T细胞浸润增加，其中大部分是CD8+T细胞，且外周血中IFNγ、TNFα、IL-2和CXCL10浓度增加，这些结果都表明GEN1046在体内具有很强的激活CD8+T细胞的能力。

研究人员还在食蟹猴中进行了毒理学实验，在GEN1046的剂量达到30mg/kg（Q3W，治疗两周期）后，食蟹猴耐受性良好，未观察到天冬氨酸转氨酶（AST）或丙氨酸转氨酶（ALT）升高。

临床前的药效学及安全性研究均表明GEN1046的治疗潜力，因此，研究人员在晚期实体瘤患者中开展了临床试验。

共有61例晚期实体肿瘤患者（包括12例结直肠癌、9例卵巢癌、6例胰腺癌、6例NSCLC等）参与了此次I/IIa期临床试验（NCT03917381），并以9个递增剂量水平（25-1200mg Q3W）接受GEN1046治疗，主要目的是评估GEN1046的药代动力学及安全性。患者入组前均接受过多种抗癌治疗，23例（37.7%）患者既往接受过PD-(L)1抑制剂治疗。

药代动力学分析显示，GEN1046在输液结束后很快即可达到峰浓度，在剂量低于200mg Q3W时在体内无明显蓄积。首次给药后，不同剂量水平的半衰期为2.3-10.3天。

与临床前研究结果相一致，GEN1046可显著增加患者外周血中CD8+T细胞和NK细胞数，并使得IFNγ、CXCL10等细胞因子浓度增加。

GEN1046可显著增加患者外周血中CD8+T细胞数及相关细胞因子浓度

药物的安全性分析显示，GEN1046的总体耐受性良好。共有6例（9.8%）患者出现剂量限制毒性（DLT：25mg，N=1；80mg，N=1; 140mg，N=2；200mg，N=1；800mg，N=1），包括中性粒细胞减少伴发热（4级，N=2），免疫性肾炎（3级，N=1）和转氨酶升高（3级，N=3）。所有DLT经治疗后均恢复且无后遗症。

43例（70.5%）患者发生了治疗相关不良事件（AE），最常见的AE为转氨酶升高、甲状腺功能减退和疲劳。

大多数AE为1-2级，17例（27.9%）患者出现至少一次3-4级AE。6例（9.8%）患者出现3级转氨酶升高，所有患者均未出现4-5级转氨酶升高和与治疗相关的胆红素升高。除1例患者发生4级甲状腺功能减退外，其他均为1-2级。

截至2021年2月12日，4例（6.6%）患者仍在接受GEN1046治疗，患者中位随访时间为9.4个月，疾病控制率为65.6%（40/61）。4例患者达到部分缓解，包括1例三阴性乳腺癌患者（100mg剂量下）、1例卵巢癌患者（80mg剂量下）和2例NSCLC患者（80和200mg剂量下）；36例患者病情稳定。

61例患者经GEN1046治疗后效果

在患者体内，同样可以观察到GEN1046给药后外周血中CD8+效应T细胞数增加，以及IFNγ、CXCL9-11等细胞因子浓度增加。

GEN1046双特异性抗体为提高CPI的临床疗效提供了一种全新的解决途径，在阻断PD-1/PD-L1通路的同时有条件的激活4-1BB，增强T细胞的功能，达到加强疗效的效果。

本研究报道的GEN1046临床前和I/IIa期临床试验结果清楚地表明，GEN1046在体内外均具有显著的激活CD8+效应T细胞进而杀死肿瘤细胞的能力，同时在患者中具有良好的安全性与耐受性。尤其是对于CPI治疗耐受的患者，GEN1046对这些患者仍具有治疗作用。

在本研究的基础上，研究人员将扩大规模，进一步探索GEN1046治疗的安全性和有效性，并探索GEN1046与其他治疗方式联用的策略，开启免疫治疗的另一个时代的序幕。