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肝癌外泌体环状RNA-100338对血管内皮细胞成管能力的影响研究

来源:中华实验外科杂志 2020-05-21 12:40

 

 

外泌体直径在30~120 nm,具有双层膜结构,以细胞胞吐方式分泌到细胞外,是细胞间传递信息的重要载体肝癌(HCC)源性外泌体中蛋白质、RNA等物质可被其他细胞内吞,影响肿瘤细胞生长、转移,外泌体源性非编码RNA在HCC复发转移中的作用受到重视。环状RNA(circRNA)区别于线性RNA,很多circRNA由编码蛋白的基因产生,是一类新型非编码RNA,通常不编码蛋白。研究表明circRNA-100338(hsa_circ_0000130)与HCC肺转移相关,高转移潜能MHCC97H细胞来源的外泌体促进低转移潜能Hep3B细胞的侵袭能力与circRNA-100338高水平相关,但circRNA-100338过表达或表达抑制后的细胞外泌体对HCC的作用效果需要进一步研究。

为了观察人肝癌(HCC)细胞外泌体环状RNA(circRNA)-100338对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血管形成能力的影响,上海市第六人民医院黄修燕等人提取、纯化和鉴定上海复旦大学肝癌研究所建立MHCC97H细胞来源外泌体,并共孵育中国科学院上海细胞所HUVEC细胞(37 ℃、5%CO2),外泌体示踪实验追踪外泌体能否被HUVEC细胞内化。采用Lipofectamine? 2000转染试剂转染MHCC97H细胞,提取干扰circRNA-100338后的HCC细胞上清液外泌体(1 g/L);增殖实验用于检测HUVEC细胞增殖能力变化(测量波长450 nm);血管形成能力实验用于评估HUVEC细胞成管(×100)。统计分析采用独立样本t检验。

结果显示,透射电子显微镜观察到MHCC97H细胞来源的外泌体多数呈圆形或椭圆形,粒径分布峰值在120 nm,符合外泌体粒径特征,蛋白质印迹法(Western blot)检测到外泌体标志蛋白。MHCC97H细胞来源的外泌体被HUVEC细胞内化。肝癌circRNA-100338干扰组和对照组的外泌体分别共培养HUVEC细胞48、72、96 h后HUVEC细胞增殖[吸光度(A)值]分别为0.358±0.005和0.436±0.011,差异有统计学意义(t=-16.227, P<0.01)、0.661±0.052和0.888±0.031,差异有统计学意义(t=- 9.146, P<0.01)及1.191±0.084和1.542±0.038,差异有统计学意义(t=-9.296, P<0.01),干扰组血管内皮细胞增殖能力和对照组比较显着下降,差异有统计学意义(P<0.05)。干扰组HUVEC成管能力下降,成管结节细小。

本研究发现肝癌外泌体circRNA-100338增强HUVEC细胞增殖能力,进而促进内皮细胞血管新生。(生物谷Bioon.com)

 

 


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