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研究发现脂多糖刺激肺泡上皮细胞分泌的外泌体对肺泡巨噬细胞的致炎效应

来源:中华急诊医学杂志 2020-04-24 13:06

 

脓毒症肺损伤在危重症患者中有着很高的发病率和病死率,主要特征表现为炎性细胞活化和弥漫性肺泡损伤。革兰阴性细菌外膜释放的脂多糖(LPS)被认为是引起脓毒症肺损伤的重要因素。当机体受到LPS刺激时,可导致肺泡上皮细胞、肺毛细血管内皮细胞和肺间质的急性弥漫性损害,巨噬细胞在肺内聚集、浸润、活化,释放大量炎症介质和细胞因子,引起急性肺损伤甚至急性呼吸窘迫综合征。
为了探讨脂多糖(LPS)刺激肺泡上皮细胞(RLE-6TN)分泌的外泌体对肺泡巨噬细胞(NR8383)的致炎效应,南昌大学第一附属医院丁成志等运用Transwell共培养体系,将经过不同处理的RLE-6TN细胞(正常组、LPS刺激组、外泌体抑制剂组、外泌体抑制剂预处理+LPS刺激组)分别与NR8383细胞共培养,NR8383细胞单培养作为空白对照组,共培养12 h后利用荧光定量PCR(qPCR)法检测各组NR8383细胞中IL-6、TNF-α、IL-1β的mRNA相对表达量。为进一步探讨肺泡上皮细胞分泌的外泌体对NR8383炎症反应的影响,采用差速超速离心法分别提取实验组外泌体(LPS刺激RLE-6TN细胞分泌的外泌体)和对照组外泌体(正常RLE-6TN细胞分泌的外泌体),运用透射电镜、蛋白免疫印迹鉴定外泌体,用qNano粒子直径分析仪检测外泌体粒子直径。将NR8383细胞分为实验组,对照组,PBS组,分别加入外泌体悬液(10 μg/mL,实验组和对照组)和等体积的PBS,培养12 h后,用激光共聚焦显微镜观察NR8383细胞对外泌体的吞噬,用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞上清液中炎症因子的IL-1β、TNF-α、IL-6的表达水平。

结果发现:Transwell共培养实验中,与空白对照组相比,LPS组的炎症因子mRNA相对表达量显著升高(P<0.01),而与LPS组相比,外泌体抑制剂预处理+LPS组的炎症因子mRNA相对表达量却明显降低(P<0.01);提取的外泌体经过透射电镜观察为圆形或椭圆形囊泡,直径为40~100 nm,表达外泌体标志物CD63和CD9;两组外泌体与NR8383细胞共培养5 h后,激光共聚焦显微镜下见胞内散在分布被吞噬的红色荧光外泌体。实验组、对照组外泌体分别作用于NR8383细胞后,与PBS组相比,实验组外泌体引起NR8383细胞炎症因子表达的显著升高(P<0.01),对照组外泌体则差异无统计学意义(P>0.05)。

LPS刺激肺泡上皮细胞分泌的外泌体能够激活肺泡巨噬细胞产生致炎作用。(生物谷Bioon.com)

 

 


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