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抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单克隆抗体的制备

来源:中科院微生物研究所 2008-09-05 11:15

微生物学报Acta Microbiologica Sinica

48(7):929~934;4 July 2008

祭芳1,2,陈正贤3,徐剑宏1,陆琼娴1,史建荣1*
(1江苏省农业科学院,南京210014)
(2南京农业大学植物保护学院,南京210014)
(3浙江大学生物技术研究所,杭州310029)

摘要:【目的】小麦赤霉病菌产生的毒素不仅在病害发展过程中具有加重赤霉病的作用,而且污染谷物导致严重的食用安全性问题。由于赤霉病的普遍发生,有必要建立快速、灵敏、有效的毒素检测方法,本试验旨在制备可用于检测被脱氧雪腐镰刀菌烯醇污染的粮谷类特异性单克隆抗体。【方法】本实验首先将脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的衍生物3-半琥珀酰-脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3-HS-DON-OVA)与卵清蛋白(OVA)采用碳化二亚胺法进行偶联得到人工抗原,以此人工抗原免疫BAL B/C小鼠,取该鼠脾细胞与SP2/O鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选和克隆,得到了1株能稳定分泌DON抗体的单克隆细胞株(3B2),并制备单克隆抗体腹水。【结果】经检测3B2的抗体类型及亚类均为IgG1,其轻链为κ链。腹水通过间接酶联免疫吸附测定效价在1×10?7以上。该单克隆抗体与脱氧雪腐镰刀菌烯醇特异性结合反应的50%抑制质量浓度为29μg/L,除与3-acetyldeoxynivalenol(3-Ac-DON)的交叉反应率为78.38%,与其他脱氧雪腐镰刀菌烯醇结构类似物无交叉反应。【结论】本实验所制备的单克隆抗体有较高的灵敏度和特异性,具有较好的应用价值。

关键词:脱氧雪腐镰刀菌烯醇;单克隆抗体;酶联免疫吸附测定

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更多全文请查看链接:http://journals.im.ac.cn

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