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第二节 寄生虫人工培养

来源:www.bioon.com 2007-08-08 12:21

第二节 寄生虫人工培养

  本书仅介绍三种原虫的人工培养。

  一、溶组织内阿米巴培养。

  1.营养琼脂双相培养基

  ⑴固体部分:牛肉浸膏3g;蛋白胨5g;琼脂 15g;液体1000ml(见“液体部分”)。
⑵液体部分:氯化钠8g;氯化钾0.2g;氯化钙0.2g;氯化镁0.01g;磷酸氢二钠2g;磷酸二氢钾0.3g;蒸馏水1000ml。

  制备先配液体部分2000ml,氯化钙与氯化镁另装小瓶,高压灭菌(压力6.81公斤20分钟)后冷却,合并一起,取1000ml配固体部分,经沸水浴2~3小时,使完全溶解。若有残渣可用4层纱布过滤除去,趁热将滤液分装试管,每管5ml,高压灭菌,形成斜面,冷却后放冰箱中备用。接种前,每管加液体部分4.5ml和牛血清0.5ml,并加米粉20mg(用大米粉分装小管,经180℃烤箱消毒3次)。

  2.洛克氏液鸡蛋血清培养基

  ⑴培基成分:洛克氏液70ml;灭活血清(每管加0.5ml);米粉(每管加20mg);鸡蛋4个。
⑵洛克氏(Locke)液:氯化钠9g;氯化钙0.2g;氯化钾0.4g;碳酸氢钠0.2g;葡萄糖(压力3.63公斤15分钟)2.5g;蒸馏水1000ml。

  制备先配洛克氏液1000ml,取鸡蛋用肥皂水洗刷净,以70%酒精洗净后,破壳将蛋黄、蛋清倾入含70ml洛克氏液的小三角烧瓶内,加有玻璃珠,充分摇动使其内含物混合,之后分装消毒试管内,每管约5ml,置斜位在70℃下经1小时凝固斜面,翌日再置高压消毒20分钟。接种前每管加洛克氏液4.5ml、马血清0.5ml、米粉20mg。

  二、阴道毛滴虫培养

  常用肝-胨-糖培养基的培养方法。

  1.培养基的配制:15%肝浸液100ml;蛋白胨2g;葡萄糖0.5g。

  将以上成分混合,加热使溶,经滤纸过滤,调节pH至5.5~6.0。每管分装5ml,8磅20分钟高压灭菌,冷却后,置37℃恒温箱中24小时,证明无菌后,贮存于冰箱备用。接种前每管加灭能无菌马血清1ml,即可用。

  15%肝浸液的制备:取牛或兔肝15g,洗净,剪碎如小米粒大小,浸入100ml,蒸馏水中,置冰箱过夜,次日煮沸半小时,用4层纱布过滤除去渣滓,补充蒸馏水至100ml,即成15%肝浸液。

  2.培养方法①以无菌棉拭从阴道后穹窿处取分泌物,无菌接种入上述的培养基中;②初次接种和第1、2次转种时,应加青霉素5~10万单位/2ml培基;③培养温度为35~38℃为宜;④pH在5.4~6.8之间。

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