《保健食品功能评价斑马鱼试验规程》团体标准解读

近期，由中国保健协会管理归口，环特生物牵头，中国标准化研究院、农业农村部食物与营养发展研究所、中国疾病预防控制中心营养与健康所、中国中医科学院中药研究所、中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所等22家企业、科研院所共同起草的团体标准——《保健食品功能评价 斑马鱼试验规程》（T/CHC2003-2022）正式发布并实施。

团体标准发布的背景

近期，国家市场监管总局组织发布了《关于发布〈允许保健食品声称的保健功能目录 非营养素补充剂（2022年版）〉及配套文件的公告（征求意见稿）》，并公开征询意见。该文件对于规范整个保健食品行业具有重大意义，其中配套文件之一《保健食品功能检验与评价方法（2022年版）》包括全部24种保健功能的评价方法，并由强制性方法改为推荐性方法，也积极鼓励功能评价方法创新。

斑马鱼作为一种小型脊椎类模式生物，其实验方法既有体外实验快速、高效的特点，又具备哺乳动物实验相关性好、预测性高的特点。在营养保健食品的研发和评价过程中，斑马鱼实验显示出其独特优势和价值，在原料筛选、配方研发及产品功效评价等方面的应用日渐广泛，取得了显著的科研和产业化成果。

斑马鱼技术，不仅可以助力企业缩短产品研发周期，降低产品研发成本，提升产品质量，从而进一步提高产品市场竞争力，促进行业繁荣发展，而且，为保健食品功能评价提供了一种快速、高效的体内评价方法，能够帮助企业更好地适应保健食品行业消费者需求变化快、产品研发周期短的发展趋势，让保健食品更好地服务于民众健康。

标准重点内容

1. 适用范围：本文件规定了斑马鱼用于评价保健食品功能的技术要求，术语和定义、试验流程、受试样品信息确认、斑马鱼准备、试验操作、结果评价及试验报告撰写等内容。

本文件适用于普通食品及保健食品的原料筛选、配方研发及产品功能评价的斑马鱼试验。

2. 重点技术内容：

（1）斑马鱼准备

1.1 按照GB/T 39649的规定执行斑马鱼质量控制。

1.2 根据保健食品功能选择合适的斑马鱼模型。

举例如下：a）有助于抗氧化功能：推荐用甲萘醌处理受精后3天（3 dpf）的野生型AB品系斑马鱼24 h建立斑马鱼氧化应激模型；

b）润肠通便性能检测：不需要造模；

c）有助于维持血脂健康水平功能：推荐用高糖高脂饲料处理5 dpf的野生型AB品系斑马鱼鱼48 h建立斑马鱼高糖高脂模型；

d）有助于维持血糖健康水平功能：推荐用高糖高脂饲料处理5 dpf的野生型AB品系斑马鱼鱼48 h建立斑马鱼高糖高脂模型。

1.3 选择发育正常且状态一致的斑马鱼进入试验程序阶段，不同年龄段斑马鱼正常发育状态的典型图：

（2）受试样品前处理

2.1 不同性状受试样品的前处理方法见表1:

表1　不同性状受试样品前处理方法

2.2　受试样品储备液宜用标准稀释水（标准稀释水的配制见附录B）配制，受试样品难以用水溶解时可考虑使用低毒的助溶剂或分散剂。

推荐的溶剂有：二甲基亚砜、乙醇、 甲醇、二甲基甲酰胺、三甘醇。适合的分散剂有：聚氧乙烯化脂肪酸甘油酯、吐温80、0.01%的纤维素甲醚、聚氧乙烯化氢化蓖麻油。

2.3 储备液配制完成的受试样品应做标识，包括受试样品名称、受试样品浓度、溶剂名称、配制日期、配制人。

（3）暴露条件

保健食品功能评价的斑马鱼模型暴露条件如下：

a) 持续时间：通常为4 h-72 h；

b) 更换试验溶液：通常暴露时间在24 h及以内不需要更换溶液。如受试样品富含营养物质，试验溶液容易腐败变质，可考虑换液，换液频率宜根据水质情况调整；

c) 光照：暴露期间避光处理，避免光照对受试样品稳定性的影响；

d) 水温：26～28.5 ℃；

e) 溶解氧：6 mg/L饱和溶解氧；

f) pH：6.8～7.5。

（4）确定NOEC（未观察到效应浓度）

实时观察并清除异常的斑马鱼，对斑马鱼的死亡和其它毒性效应进行记录，确定受试样品的NOEC。斑马鱼异常表现如下：

a) 死亡判断标准：静止不动、无心脏跳动、躯干呈白色不透明颜色、对机械刺激无反应。

b) 异常表型：心包水肿、静脉瘀血、血流缺失/减少、出血、脑变性/萎缩/水肿、下颌畸形、眼畸形/水肿、肝脏变性/肿大/萎缩、卵黄囊吸收延迟、肠道发育异常、躯干弯曲/缩短/水肿、肌肉变性、鳔未充气。

c) 异常行为学指标：身体侧翻、游动不协调、游动剧烈和反常的静止。

（5）造模

选择受精后一定天数的斑马鱼，用诱导剂处理一段时间，建立斑马鱼保健食品功能评价模型。根据保健食品功能选择合适的斑马鱼模型。

（6）斑马鱼暴露

根据试验需求，预先筛选好足够数量且发育正常的斑马鱼胚胎，并随机分配到试验容器中，每孔斑马鱼数量至少为10尾。用模型诱导剂建立斑马鱼模型，然后向试验容器中加入一定体积的受试样品溶液（饲养密度宜为1尾/100 μL）、阳性对照样品。充分混匀后，用铝箔纸包裹，在28℃生化培养箱中避光孵育至终点。

该标准实施的意义

该标准是环特生物携手国内22家权威科研院所、企业发布的国内首个用于食品保健功能检测的完整斑马鱼技术规程，不仅填补了我国食品保健功能检测领域斑马鱼技术规程团体标准的空白，从检测依据、斑马鱼来源和品系等信息、试验条件和方法、试验结果、数据处理与统计方法、推荐参数等关键技术内容进行了充分的实验规范规定及技术创新，其结果适用于保健食品、功能性食品及其原料和配方的功能评价，可操作性、引领性、先进性等关键指标均达到了先进水平。

而且，该标准将进一步助力我国斑马鱼技术应用标准体系的完善，全面提升我国斑马鱼技术在保健食品行业功能评价方面的标准化及应用化水平等，对行业具有重要的指导性意义与推动性作用。

延伸阅读：

什么是“Verified by Zebrafish智鱼优检”

Verified by Zebrafish（智鱼优检），是环特生物旗下致力于促进“医-健-美-食”产业品质升级的生态价值品牌。其最突出的底色，源于我们围绕模式生物斑马鱼（Zebrafish），开展近20年的技术创新与产业协同，最终面向不同行业客户，提供从“原料-配方-成品”全品质链路的生物检测评价服务。在经过斑马鱼验证后，针对实验结果优异的被检物，授予“智鱼优检Verified by Zebrafish”标识，以此证实其具备更高品质。

生态价值

产业：斑马鱼生物检测模式是对现有单一理化检测体系的升级

我们相信，“生物+理化检测”融合的高阶检测模式，是超越单一理化检测的更高标准，亦会是产业健康发展与护航品质消费的必由之路

企业：发现验证原料，配方与成品的优质功效与安全性

帮助企业进行新原料的筛选，老原料发现新功效，配方和成品的功效与安全性验证，提升企业品质管理的效率与敏感性，为优质产品提供科学证言与包装赋能

消费者：品质升级语境下全新的消费决策坐标

被授权使用“Verified by Zebrafish”的产品，代表其在生物效应层面具备更高品质。