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HPA金标抗体——高品质成就可靠结果

来源:生物谷 2017-10-26 17:04

2015年5月Nature文章“BLAME IT ON THE ANTIBODIES”为整个科研届敲响了一次警钟。抗体选择不当会使实验室遭遇“重复性危机”,甚至是“毁灭性”结果!

面对市场上超过300家的抗体公司,200多万种的抗体。抗体质量参差不齐,服务水平差距明显,科研者们该如何选择?

HPA金标抗体除了具有高特异性/低交叉反应的优点,每种抗体均有超过700多张IHC、IF和WB图片验证数据,可谓理想的实验选择。

  
什么是HPA金标抗体?

The Human Protein Atlas是一个公共门户网站,隶属于人类蛋白质组学研究项目。该项目的目标是生产覆盖全基因组所有基因的抗体,系统性地探索人类蛋白质组奥秘。该项目的完成取决于高通量金标抗体生产技术与高质量的蛋白表达谱(多种人类组织和细胞获得)的完美结合。目前HPA已公布1.8万多种抗体,每种抗体均有超过700多张IHC、IF和WB图片验证数据,被称为:HPA金标抗体。

   
为什么称之为HPA金标抗体

HPA金标抗体(Prestige Antibodies)是具有高度特异性的抗体,其抗体应用经过全面验证,所有特异性验证数据都可以在Human Protein Atlas (HPA) Portal (proteinatlas.org)获得。金标抗体的高度特异性/低交叉反应主要基于以下几个方面的质量控制:1. 抗原序列(位置)选择;2. 多克隆抗体亲和层析纯化;3. 多种实验方法验证;4. 金标抗体严格审批流程。

  
1.抗原选择

HPA金标抗体的免疫抗原是重组人蛋白表位识别标签(PrESTs),表位识别标签一般含有50-150个氨基酸。表位识别标签经过设计和筛选,使得它们含有独特的表位,并且适合激发高特异性的抗体。通过对人全基因组扫描的方式,确保用于生产抗体的蛋白表位识别标签与其它蛋白有最低的同源性。同时,抗原表位还会排除信号肽和蛋白跨膜区。

  
2.亲和层析纯化

HPA金标抗体通过亲和层析方式进行纯化(以PrESTs抗原作为配基),采用三步法免疫层析的纯化工艺:HisABP特异性标签去除,PrESTs特异性捕获,最后通过排阻色谱进行缓冲液的交换,不仅保证了抗体的纯度,同时有利于抗体长期保存。

  
3.多种实验方法验证

   
·  蛋白芯片

金标抗体的特异性和纯度首先经过蛋白芯片来验证。一系列重组人蛋白表位识别标签(PrESTs)标记在微矩阵芯片上,通过荧光信号确定抗体的特异性。

    
·  免疫组化 (IHC)

免疫组化验证主要是对目标蛋白的检测以及其在组织、细胞和亚细胞水平的定位实验。金标抗体需要在46个正常人类组织(每个实验重复3次)、432个人肿瘤组织样本中(20种常见肿瘤组织,每种肿瘤组织来源于不同病人,最多的一种肿瘤样本来源于12个不同的病人)做蛋白表达分析。此外,还有56种细胞系的免疫染色实验数据。

    
·  Western Blot (WB)

金标抗体还需通过对肝脏和扁桃体组织提取物、去除IgG和白蛋白的混合血浆以及两种人类细胞系中的蛋白表达进行WB验证。此外,金标抗体还要在过表达的体系中做WB验证。

   
·  免疫荧光 (IF)

金标抗体需要通过指定的人类三个细胞系中(U-2 OS, A-431和U-251 MG)做亚细胞定位的免疫荧光验证,以获得更详细的亚细胞定位信息。同时,也会有转录水平的验证,以确保金标抗体实验结果的准确性。

   
注释:

正常组织、肿瘤组织和细胞的免疫组化图片都会经过权威病理学家的检验和注释。同时,针对不同的目的蛋白,金标抗体验证的免疫组化、WB和免疫荧光的实验数据也会和发表文献以及生物信息学的数据作比较,以确保验证数据的准确性。

      
4.严格的审批流程

金标抗体认证通过必须是综合考虑免疫组化、WB和免疫荧光的实验验证结果以及生物信息学和参考文献。HPA项目有时候针对同一个蛋白也会生产一对抗体,彼此之间抗原表位不同,两个抗体之间相互验证。大多数情况下,这两个抗体的IHC验证数据是一致的,如果IHC结果有差异,可能存在蛋白异构体的现象,例如不同的拼接体或者翻译后修饰。超过一半的金标抗体通过严谨的实验验证、实验数据与文献或者生物信息学预测的结果是一致的,这部分金标抗体就会通过认证,在HPA官网公布。

   
HPA金标抗体能为你的实验带来什么?
高特异性的实验结果
:金标抗体均通过严格抗原序列比对筛选
丰富的实验验证图片:每一支金标抗体都经过蛋白芯片、免疫组化、WB和免疫荧光的实验验证。
严谨的参考文献和生物信息学预测:每一支金标抗体除了实验验证,发表文献和生物信息学预测也是抗体的重要参数。
更方便的查询实验数据:每一支金标抗体实验验证结果都可以在the Human Protein Atlas (proteinatlas.org) 网站上免费公开查询,包括免疫组化,WB和免疫荧光的图片数据。

   
HPA金标抗体应用举例

下图为抑癌基因ARID1A (抗体货号:HPA005456)在不同组织和细胞系中的表达和分布,更多检测数据请登录http://www.proteinatlas.org查询。

   
如何查询HPA金标抗体?

你可以登陆网站www.sial.com/prestige快速查询HPA金标抗体。 


  
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