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慢性肾功能障碍研究二三事

来源:生物谷 2017-09-18 17:43

目前世界有着诸多关于肾脏慢性移植功能障碍(CTD)与持续性的免疫炎症最终导致组织重塑(包括肝内动脉中新内膜的形成)的案例。研究表明,受体来源的α-SMA +平滑肌样细胞存在于异源移植肾脏CTD中。含有骨髓细胞的人体PBMC(外周血单个核细胞)在体外α-SMA +具有分化能力,但是原始细胞的表型是未知的。

本研究旨在发现包含细胞与平滑肌样细胞的单细胞亚群的分化能力,是否肾移植受体CTD的单核细胞亚群会发生变化。实验中,以CD14、CD16的表达为基础分选健康对照组的单核细胞亚群,研究骨髓间质标记物α-SMA和SM22α的基因表达水平。

CD14+/CD16++显示对比增加的α-SMA和SM22αmRNA表达水平与CD14++/ CD16-得到增加的分化潜能接近于平滑肌样细胞。流式细胞仪结果显示非CTD移植患者的CD14+ /CD16 ++比例减少,而且CTD患者的减少比例更高。为了确定CD14+/CD16++单核细胞和体外α-SMA +细胞生长潜力之间的关联性,健康对照组和CTD移植受体,非CTD移植受体的PBMC在指定条件下培养,最终确定其显著相关性(P = 0.0002,r= 0.62)。双染色的α-SMA和CD16显示CTD患者肾脏移植中α-SMA + CD16 +细胞的存在,即使数量很低。

数据结果表明,相比于CD14++CD16-,平滑肌样细胞相关基因的CD14+CD16++表达增加。CTD肾移植患者的单核细胞亚群减少,可能是由于移植中的选择性迁移的结果。

在对细胞的定量分析与α-SMA的表达表现测定时,利用奥地利TissueGnostics公司Tissue FAXS显微镜成像系统,TissueQuest软件分析系统。



图像获取部分: 
Fig.5,肾脏移植中荧光染色的CD16与α-SMA的联合表达。(A)人体脾脏中CD16/CD68, CD68/α-SMA和CD16/α-SMA的双重荧光标记。其中(B) CD16/CD68, (C) CD16/CD68 , (D) CD16/α-SMA。每项中上行non-Tx代表非移植人类肾脏,下行IF/TA代表肾脏移植。(D)中箭头指向圈出区域CD16+α-SMA+双阳性细胞。



Fig 3 肾脏移植受体和健康对照组中单细胞亚群特征。(A)散点图中对细胞进行正向回溯。得到细胞亚群的数量(1)总活细胞数量(2)单细胞数(3)淋巴细胞(B)健康对照组,CTD肾脏移植受体和非CTD肾脏移植受体中活细胞CD14+频率。(C)PBMC中CD14和CD16表达类型。区域2中的数据。(D)健康对照组与肾脏移植受体的单细胞亚群的频率。



Fig 4 CD16-和CD16++中标记物的基因表达。(A)PBMC中CD14与CD16的表达类型。细胞群做到细胞种类的分选:(1)CD14++/CD16- (2)CD14+/CD16++  (B)单细胞亚群中的α-SMA和SM22α的基因表达。(C)14天的PBMC培养,α-SMA +细胞数与健康对照组和肾脏移植受体中的CD14+/CD16++ 频率关联 。 (生物谷 bioon.com)
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