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Biotech Bioeng:利用细菌产生蛋白质药物的新技术

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来源:生物谷 2013-06-09 00:56

2013年6月8日 讯 /生物谷BIOON/ --近日,刊登在国际杂志Biotechnology and Bioengineering上的一篇研究报告中,来自英国谢菲尔德大学的研究者通过研究开发出了一种廉价高效的技术,可以利用细菌来获得复杂的蛋白质药物。在文章中,研究者使用大肠杆菌来进行研究,从而就可以增加其细胞产生特殊修饰蛋白质的产量以及改善其稳定性。

2013年6月8日 讯 /生物谷BIOON/ --近日,刊登在国际杂志Biotechnology and Bioengineering上的一篇研究报告中,来自英国谢菲尔德大学的研究者通过研究开发出了一种廉价高效的技术,可以利用细菌来获得复杂的蛋白质药物。在文章中,研究者使用大肠杆菌来进行研究,从而就可以增加其细胞产生特殊修饰蛋白质的产量以及改善其稳定性。蛋白质的修饰目前在三分之二的人类治疗性药物中使用,而且其包括将特殊的糖类基团添加到蛋白质上,也就是糖基化的过程。

基于蛋白质的药物可以为现代医药开发提供帮助从而来解决人类的健康问题,比如糖尿病、癌症以及关节炎等。尽管简单的蛋白质是通过微生物细胞来产生的,可是这些复杂的蛋白质药物却是在动物细胞中产生的,因为其可以进行糖基化作用从而来控制药物的效力和稳定性,并且避免病人的免疫反应。

利用细菌来产生蛋白质来开发药物或许是一种更为有效的药物开发方法,因为使用动物细胞非常昂贵,然而在细菌细胞中糖蛋白的产量却非常少,其通常比在动物细胞中的产量低几千倍。

在这项研究中,研究者开发了一种逆代谢工程的技术,其可以使得研究者对细胞进行扫描从而鉴别出那些可以高效产生糖蛋白的细菌菌株;使用这项技术研究者就可以使得糖蛋白产量是实验室条件下的7倍。随后研究者使用质谱法来对细菌产生的蛋白质进行特性以及定量分析,这就使得研究者可对蛋白质进行修饰,然而改善药物的效用。

研究者Phil Wright表示,这项技术为药理学家得到和动物细胞产生的相同蛋白质提供了希望和基础,而且可以利用细菌来产生药物,并且进行不断修饰来改进药物的疗效。研究者同时也检测了这项技术对阳性抗体碎片的作用,结果显示,这种技术可以在不同蛋白质中进行作用。(生物谷Bioon.com)

Inverse metabolic engineering to improve Escherichia coli as an N-glycosylation host

Jagroop Pandhal1, Lauren B. A. Woodruff2, Stephen Jaffe1, Pratik Desai1, Saw Y. Ow1, Josselin Noirel1, Ryan T. Gill2, Phillip C. Wright1,*

An inverse metabolic engineering strategy was used to select for Escherichia coli cells with an increased capability to N-glycosylate a specific target protein. We developed a screen for E. coli cells containing extra-chromosomal DNA fragments for improved ability to add precise sugar groups onto the AcrA protein using the glycosylation system from Campylobacter jejuni. Four different sized (1, 2, 4, and 8 kb) genomic DNA libraries were screened, and the sequences that conferred a yield advantage were determined. These advantageous genomic fragments were mapped onto the E. coli W3110 chromosome. Five candidate genes (identified across two or more libraries) were subsequently selected for forward engineering verification in E. coli CLM24 cells, utilizing a combination of internal standards for absolute quantitation and pseudo-selective reaction monitoring (pSRM) and Western blotting validation. An increase in glycosylated protein was quantified in cells overexpressing 4--glucantransferase and a phosphoenolpyruvate-dependent sugar phosphotransferase system, amounting to a 3.8-fold (engineered cells total = 5.3 mg L−1) and 6.7-fold (engineered cells total = 9.4 mg L−1) improvement compared to control cells, respectively. Furthermore, increased glycosylation efficiency was observed in cells overexpressing enzymes involved with glycosylation precursor synthesis, enzymes 1-deoxyxylulose-5-phosphate synthase (1.3-fold) and UDP-N-acetylglucosamine pyrophosphorylase (1.6-fold). To evaluate the wider implications of the engineering, we tested a modified Fc fragment of an IgG antibody as the target glycoprotein with two of our engineered cells, and achieved a ca. 75% improved glycosylation efficiency. Biotechnol. Bioeng. 2013;9999: XX–XX. © 2013 Wiley Periodicals, Inc.

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