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MCP:开发出检测细菌蛋白质分泌的蛋白质组学技术

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来源:生物谷 2012-09-20 09:16

2012年9月19日 讯 /生物谷BIOON/ --近日,来自圣母大学艾克研究所的研究者开发出了一种新型方法可以直接检测细菌分泌蛋白,这或许为治疗包括肺结核在内的许多疾病提供了新的思路和方法。相关研究成果刊登在了国际杂志Molecular and Cellular Proteomics上。 研究者Champions指出,细菌可以使用多种分泌系统来通过细胞膜转运蛋白质,从而于外界环境进行相互作用。

2012年9月19日 讯 /生物谷BIOON/ --近日,来自圣母大学艾克研究所的研究者开发出了一种新型方法可以直接检测细菌分泌蛋白,这或许为治疗包括肺结核在内的许多疾病提供了新的思路和方法。相关研究成果刊登在了国际杂志Molecular and Cellular Proteomics上。

研究者Champions指出,细菌可以使用多种分泌系统来通过细胞膜转运蛋白质,从而于外界环境进行相互作用。对于引发肺结核的致病菌结合分歧杆菌来讲,这些系统可以转运蛋白质来促进细菌于宿主细胞的反应,从而引发机体产生毒性表现。

此前研究中,研究者使用融合酶或者荧光标记物来标记细菌的蛋白质,目的是为了识别细菌转移毒性蛋白质到宿主细胞中的细菌特殊基因。然而,这些方法并不能用于分析所有细菌的毒性分泌系统,这就限制了科学家理解细菌与宿主细胞反应所涉及的分子机制。

研究者使用MALDI-TOF质谱仪,对细菌蛋白质组学进行了特异性修饰,使得科学家用激光电离蛋白质从而达到检测细菌蛋白质的目的。这种新型方法可以用于特异性地监控蛋白质分泌的特殊形式,比如检测结合分歧杆菌或者金黄色葡萄球菌主要的毒力决定蛋白质。

研究者表示,这种新型技术也可用于研究其它细菌的蛋白质外排系统,这是以前的方法所不能达到的。当然这种新型技术也可以帮助科学家识别抑制细菌蛋白质分泌的新型化合物。

相关研究由国立卫生研究院等机构提供支持。(生物谷Bioon.com)

编译自:New Research Could Provide New Insights Into Tuberculosis and Other Diseases

Direct Detection of Bacterial Protein Secretion Using Whole Colony Proteomics*

Matthew M. Champion‡§¶, Emily A. Williams‖, George M. Kennedy‖ and Patricia A. DiGiuseppe Champion§¶‖,**

Bacteria use a variety of secretion systems to transport proteins beyond their cell membrane to interact with their environment. For bacterial pathogens, these systems are key virulence determinants that transport bacterial proteins into host cells. Genetic screens to identify bacterial genes required for export have relied on enzymatic or fluorescent reporters fused to known substrates to monitor secretion. However, they cannot be used in analysis of all secretion systems, limiting the implementation across bacteria. Here, we introduce the first application of a modified form of whole colony MALDI-TOF MS to directly detect protein secretion from intact bacterial colonies. We show that this method is able to specifically monitor the ESX-1 system protein secretion system, a major virulence determinant in both mycobacterial and Gram-positive pathogens that is refractory to reporter analysis. We validate the use of this technology as a high throughput screening tool by identifying an ESAT-6 system 1-deficient mutant from a Mycobacterium marinum transposon insertion library. Furthermore, we also demonstrate detection of secreted proteins of the prevalent type III secretion system from the Gram-negative pathogen, Pseudomonas aeruginosa. This method will be broadly applicable to study other bacterial protein export systems and for the identification of compounds that inhibit bacterial protein secretion.

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