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全血细胞培养染色体技术常用试剂配制

来源:来源网络 2007-06-13 21:53

一、国内实验室应用试剂配制

(一)培养液

(1)RPMI1640培养液:称取RPMI培养基9.8g,碳酸氢钠1.9g、青霉素100u/ml,加双蒸水至1000ml,调节 pH7.2~7.4无菌过滤冻存备用。

(2)小牛血清商品:成都生物制品厂。

(3)植物凝集素(PHA):自制或成品(重庆药检所)。

(4)pH调整液:5% NaHCO3溶液高压灭菌(8磅15min),0.1N稀盐酸液100ml。

(5)秋水仙素:10mg/ml无菌过滤高压灭菌(8磅10min)。

(6)磷酸缓冲液:pH7.4。

磷酸氢二钠28.8g(H2O)、磷酸二氢钾2.67g(无水),溶于1000ml双蒸水中,加肝素,终浓度为100u/ml。

(7)Giemsa染色液:

Giemsa粉剂           1g

甘油              66ml

在研钵中,加入少量甘油油仔细研磨然后放甘油全部加磨,60℃温箱中保温2h,冷却后加入甲醇66ml。装入有色瓶中混合待用。染色时用pH7.4磷酸缓冲液稀释10倍,随配随用。

(二)固定液

(1)甲酸:冰乙酸3:1混合即用。

(2)PBS缓冲液配制:

NaCl   16g   Na2HPO4(12H2O)   5.65g

KCl   0.4g  KH2PO4        0.4g

加双蒸水至1000ml pH7.0。

取5%胰酶(生理盐水配制)1ml加入50ml PBS液中(最终浓度为0.025%),4℃冰箱待用。

二、细胞培养(Bhatl B和McGee JOD,1990)

1.完全培养基

RPMI             76.0ml

胎牛血清           20.0ml

植物凝集素          2.0ml

抗生素/抗菌素溶液(100

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