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流式细胞术测效靶细胞杀伤实验

来源:丁香园论坛 2007-01-16 23:08

做免疫学特别是肿瘤学实验,总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤,老外最常用的是Cr51放射实验,但这个方法在国内的不少地方都不能做,而MTT这个方法又太老了,而且也不准确,那么替代方法就用流式细胞术,又方便,又准确,这也是偶参照老外的方法吧。

1 计数靶细胞,并加入CFSE,使CFSE终浓度达到2uM,37度30分钟。
2 拿出后,1000rpm,5min,可隐约看到细胞染成黄色,PBS洗三次
3 与效应细胞混培,作用4-6小时。
4 将细胞混合液消化取出,洗二次,PI工作液5ul,避光30分钟后上流式
5 CFSE,PI双阳性的细胞为被杀伤的靶细胞,除以靶细胞总数,即为杀伤率。

注意事项:
1。CFSE及PI的浓度必须注意,宁低勿高,个人感觉,如果标高的话,在4度放一晚好像会好一些
2。必须设全阴,CFSE单标,PI单标,CFSE+PI双标并同步化的靶细胞的参照.
3。作用时间不能太长,不要超过8个小时。


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