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养大鼠平滑肌细胞的一点心得

来源:丁香园论坛 2006-12-31 21:28

我养了快半年的大鼠气道平滑肌细胞,有一点体会,特发上来和各位战友交流一下,互相进步。
壹.  器械
显微器械:眼科剪一把,直弯眼科镊各一把,细结镊一把,手术刀一把,针头诺干
杀老鼠器械:手术剪一把,大镊子一把,弯眼科镊一把,组织钳一把,50ml烧杯一个(锡纸包好)
另外:10ml离心管两个,培养皿两个,10ml的瓶子三个,小滤器两个,硅胶板一块,培养瓶盖子诺干
贰。试剂
D-HANKS液250ml,双抗2ml(青霉素16万U/ml链霉素15万U/ml),一型胶原酶,木瓜酶,BSA。后三种加上D-HANKS配成1ml的消化液,终浓度皆为1mg/ml。无血清DMEM和含20%FBS的DMEM
叁。步骤
1.  取大鼠,称重,水合氯醛0。3ml/100g腹腔麻醉
2.  绑好大鼠,先剪开腹腔,剪断腹部大动脉放血,后剪开胸腔,取肺
3.  放入烧杯,后移入超净台,置于冰盒上。以后的操作皆在冰盒上操作
4.  倒入已加双抗的D-HANKS,清洗肺部,扯掉食管,剪掉心脏
5.  用针头将肺固定在硅胶板上,硅胶板置于培养皿里
6.  用镊子将肺的内外膜除去,只剩下平滑肌
7.  用眼科剪将肺部剪成1-2mm的小碎块
8.  将碎块移入配好的消化液中,放入培养箱中,消化15min
9.  取出,加入无血清的DMEM,约10ml,移入离心管中
10.  980转/min,离心10min
11.  倒掉上清,加入约1ml含20%FBS的DMEM
12.  将碎块用滴管加入25ml的培养瓶里,液体不要加多,有种湿湿的感觉即可。一到两天可以再加点液体
13.  大概五到七天可以爬出
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