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大鼠平滑肌细胞的另一种培养方法

来源:丁香园论坛 2006-12-30 23:23

贴壁法:

器械
显微器械:眼科剪一把,直弯眼科镊各一把,细结镊一把,手术刀一把,针头诺干
杀老鼠器械:手术剪一把,大镊子一把,弯眼科镊一把,组织钳一把,50ml烧杯一个(锡纸包好)
另外:10ml离心管两个,培养皿两个,10ml的瓶子三个,小滤器两个,硅胶板一块,培养瓶盖子诺干
贰。试剂
D-HANKS液250ml,双抗2ml(青霉素16万U/ml链霉素15万U/ml)。FBS和含20%FBS的DMEM
叁。步骤
1. 取大鼠,称重,水合氯醛0。3ml/100g腹腔麻醉
2. 绑好大鼠,先剪开腹腔,剪断腹部大动脉放血,后剪开胸腔,取肺
3. 放入烧杯,后移入超净台,置于冰盒上。以后的操作皆在冰盒上操作
4. 倒入已加双抗的D-HANKS,清洗肺部,扯掉食管,剪掉心脏
5. 用针头将肺固定在硅胶板上,硅胶板置于培养皿里
6. 用镊子将肺的内外膜除去,只剩下平滑肌
7. 用眼科剪将肺部剪成1-2mm的小碎块
8。在培养瓶中加入一到两滴的FBS,轻摇培养瓶,使血清铺满瓶底。
9。用眼科剪将碎块放进瓶中,后用滴管将碎块在瓶里铺均匀。
10。将瓶底朝上,放入培养箱中
11。四个小时后,将瓶子翻回
这样处理后,一般五天内不用看它,第六天开始,可以加入含20%FBS的DMEM

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