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BDA皮质脊髓束神经顺行示踪在大鼠脊髓损伤模型中的应用

来源:本站原创 2006-11-11 20:28

1.麻醉后将头部同定于动物实验用立体定向架卜,切开有额顶头皮,用微型钻磨去颅骨形成5ram直径大小网形骨窗

2.在手术显微镜下剪开硬脑膜,用微量注射器将10%BDA溶液(美国Molecular Probes公司产品)缓慢注入右侧的感觉运动区皮质(sensorimotor cortex)内。注射时将微量注射器同定在一 体定向支架上,选择无血管区作为注射点,每个注射点分别在距皮层表面0.5、1.0和2.0mm处各注药一次,每次剂量0.5微升 。每次注射后针头滞留10min, 然后缓慢进退针。每个动物接受10个皮层注射点,BDA注射总量为2100微升。

3.注射完毕后用薄层明胶海绵覆盖脑表面,缝合头皮。

4.2周后再次麻醉动物,打开胸腔,用4 生理盐水和4%多聚甲醛液行心脏灌注后,取出大脑和脊髓组织,置于4%多聚甲醛液中4~C保存,待处理。
   

        BDA染色显影:

1.分别取大脑和各段脊髓组织,脊髓分别取上颈段(C ),胸段(Ts嘏),腰段(L. ),
用冰冻切片机连续切片,组织切片厚度为40 m。

2.采用自由漂乳法将组织切片先后在以下溶液中孵化:
含0.1%H2O2的甲醇溶液10min、含0.5%Triton x—IOOPBS溶液(PBS—T)30min,抗生物素蛋白一生物素一
过氧化物酶复合液(avi(1inIbi0tin—per0xidase,美国Vector Laboratories公司产品)lh;用PBS-T液冲洗组织切片两次,每次各10min,最后在二氨基联苯胺(Vector laboratories公司产品)中显影5rain。

3.上玻片、风干、脱水及盖玻片覆盖。


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