用AAV病毒在体内长期表达双抗，可作为通用型CAR-T的替代方案

大多数药物是间歇性给药，这会导致药代动力学高峰和低谷。尤其是那些半衰期短的药物，需要频繁给药，这种低谷对于癌症治疗来说是一个特殊的挑战，会导致癌症的复发和耐药性的出现。而且，频繁给药本身对患者来说也非常麻烦，可能需要频繁前往医院进行，而且可能导致额外的感染风险。

癌症、心血管疾病和慢性疼痛等疾病需要长期治疗，而风湿病等其他疾病需要长期间歇治疗。近年来，基因疗法在治疗单基因突变遗传疾病领域取得了实质性突破，能够将外源基因在患者体内稳定持续表达数月乃至数年时间。

那么，可否利用基因疗法单次给药持续稳定表达治疗性蛋白的特点来解决蛋白类药物的药代动力学的高峰和低谷问题？

近日，美国全国儿童医院的研究人员在 Science 子刊 Science Advances 上发表了题为：Leveraging gene therapy to achieve long-term continuous or controllable expression of biotherapeutics 的研究论文。

该研究使用腺相关病毒（AAV）来表达双特异性抗体（CD19×CD3），从而解决了双特异性抗体需要反复多次给药的缺点和 CAR-T 疗法生产流程繁琐、需要个性化定制的缺点，实现了一次给药，长期稳定表达治疗性双抗，可作为通用型 CAR-T 疗法的替代方案。此外，该研究还开发了诱导型版本，利用外显子跳跃技术，可实现按需表达、重复表达。

Blinatumomab，是由安进公司（Amgen）开发的 CD19×CD3 双特异性抗体，已被美国食品和药品监督管理局（FDA）批准用于治疗儿童和成人B细胞急性淋巴细胞白血病。但 Blinatumomab 的半衰期较短，仅为2.1小时，需要在2-6个月的时间内进行多次静脉输注。

在这项研究中，研究团队构建了一个重组腺相关病毒（rAAV），用于表达 Blinatumomab，研究团队发现，在其N端添加 secrecon 信号肽能够显著改变蛋白的分泌，研究团队将 AAV 病毒产生的这一分泌蛋白产物命名为 αCD19-αCD3 二聚体。讲这种解决方案成为 TransJoin。

进一步动物实验显示，只需要单次注射，AAV 就能长期表达治疗性的 αCD19-αCD3 二聚体超过一年时间，实现对肿瘤的长期治疗，显著延长了淋巴瘤小鼠模型的生存期。

这一长期治疗效果与 CAR-T 细胞疗法接近。而与 CAR-T 疗法不同的是，TransJoin 是一种现货即用型解决方案，避免了 CAR-T 疗法繁琐的生产流程及昂贵的成本。

此外，考虑到有些疾病只需要短期治疗，或需要多次、间歇性治疗。研究团队还开发名为 TransSkip 的诱导性二聚体技术。将癌基因  KRAS 基因的1号外显子插入到 CD19 编码序列中，这会导致 AAV 表达出无功能的蛋白，而在使用 Morpholino 后，会造成外显子跳跃，从而让 AAV 表达出全长的 αCD19-αCD3 二聚体。同时，这种外显子跳跃还会导致抑制癌基因 KRAS 的表达。

这种诱导型的 TransSkip，能够在 AAV 注射后实现按需表达和多次反复表达，对于癌症以外的其他疾病类型，可进行短期治疗或间歇性多次反复治疗。

总的来说，该研究使用腺相关病毒（AAV）来表达双特异性抗体（CD19×CD3），从而解决了双特异性抗体需要反复多次给药的缺点和 CAR-T 疗法生产流程繁琐、需要个性化定制的缺点，可作为通用型 CAR-T 疗法的替代方案。