CANCER CELL:CBS/H2S过表达通过下调CD44抑制结肠癌细胞的增殖和转移

2022年2月26号 讯/生物谷BIOON 结直肠癌(CRC)是一种危及生命的疾病，在全球所有人类恶性肿瘤中死亡率位居第二。它也是中国第二常见的癌症，占2020年新发癌症病例的12.2%。CRC的生物学和分子机制十分复杂，H 2S在结直肠癌中的潜在作用一直是广泛研究的主题。



近来Yuyang Zhang教授及其团队针对CBS/H2S的过表达展开了研究，旨在证明过度表达的CBS和外源性H2S可抑制结肠癌细胞的体外增殖和迁移。



本实验纳入了具有靶向CBS mRNA序列的RNA (shRNA)，采用具有乱序序列的shRNA的慢病毒用作为阴性对照（Sigma，USA）。Caco-2 细胞 10 μg/ml 聚凝胺感染，然后用 6 μg/ml 嘌呤霉素选择7天。使用 CRISPR/Cas9 系统对 HT-29 细胞系进行 CBS (KO-CBS) 的稳定敲除。将引导寡核苷酸磷酸化、将其克隆到 pHBLV-U6-gRNA-EF1-CAS9-PURO 载体的 BsmBI 位点，然后通过测序验证构建的载体，筛选 7 天后收集具有嘌呤霉素抗性细胞。实验最后对所有基因编辑的细胞系使用蛋白质印迹来评估沉默或过表达效率。使用 CCK-8 试剂盒进行 CCK-8 测定以测量细胞增殖能力，集落形成测定用于细胞增殖分析，球体形成测定用于检测细胞更新能力。在裸鼠模型中，在 CBS 过表达的细胞中观察到异种移植物生长速率减弱和肝转移减少。


研究人员发现了在结直肠肿瘤组织和癌源性细胞系中，CBS 的表达上调与肿瘤生长和癌变密切相关，CBS 过表达抑制 CRC 细胞增殖、克隆形成、球体形成和体外迁移。CBS 的过表达减弱了体内 CRC 细胞的生长和肝转移。